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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】怎么做都提不出DNA，请高手帮一下忙喽！！！！
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 另一个天堂 at 2011-03-29 22:11:27:
首先考虑是细胞破碎。如果没问题，可以用乙醇代替异丙醇沉淀DNA，沉淀时间延长

异丙醇不会沉淀多糖啊，5sRNA什么的，我还有一问题，就是为什么我异丙醇沉淀出那么多的絮状沉淀，每次离心出好多白色东西，有时我加50ul的无菌水溶都溶补了，跑带还没有DNA，那白的东西是什么呢？？
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11楼2011-03-30 15:42:36
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)
1949stone: 化工 有钱 就用试剂盒 2011-04-21 12:56:09
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-29 22:24:50:
直接用kit提……现在提DNA的试剂盒都白菜价了

我也想，可这主要是做化工的，就我自己在做，所以没人跟我商量一下做不出的原因，而且我就两种菌，老师要我自己必须做，很悲剧。。。。。
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12楼2011-03-30 15:46:44
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weekend883

金虫 (小有名气)
★
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1949stone: 可以引用回复 2011-04-21 12:56:43
同问，我最近做的也有这个问题，现在正百思不得其解呢，望高手帮助啊！
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13楼2011-03-30 16:14:21
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沙中清泉

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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1949stone(金币+3): 可以给原文否 2011-04-21 12:57:15
A ten-minute DNA preparation from yeast efficiently releases autonomous plasmids for transformation of Escherichia coli. 查一下这篇文章里提基因组的方法，貌似什么菌都可以提出来
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14楼2011-03-30 16:28:49
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jjlbest

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
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1949stone(金币+2): 鼓励 2011-04-21 12:57:26
抽提缓冲液的PH值对吗？我们知道提RNA时时水饱和酚，而DNA是TRIS饱和酚，可见PH是很重要的。
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15楼2011-03-30 17:15:18
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zmw_520

禁虫 (小有名气)
★ ★
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1949stone(金币+1): 也许 2011-04-21 12:57:39
本帖内容被屏蔽
16楼2011-03-30 17:48:49
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by jjlbest at 2011-03-30 17:15:18:
抽提缓冲液的PH值对吗？我们知道提RNA时时水饱和酚，而DNA是TRIS饱和酚，可见PH是很重要的。

最后总的缓冲溶液的PH是多少啊？我只是调了Tris-Hcl=8
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17楼2011-03-30 19:51:16
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by zmw_520 at 2011-03-30 17:48:49:
或许你跑出来的是DNA，只是有RNA污染呢？？？加RNA酶除一下RNA咯~~~

不能吧，RNA会跑的比较快啊，有拖尾的感觉的啊！！那我再除一下RNA
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18楼2011-03-30 19:58:39
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另一个天堂

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
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1949stone(金币+3): 有可能 2011-04-21 12:58:06
引用回帖:
Originally posted by 鬼笔坏坏 at 2011-03-30 15:42:36:
异丙醇不会沉淀多糖啊，5sRNA什么的，我还有一问题，就是为什么我异丙醇沉淀出那么多的絮状沉淀，每次离心出好多白色东西，有时我加50ul的无菌水溶都溶补了，跑带还没有DNA，那白的东西是什么呢？？

估计是DNA提纯时留下的杂质，例如蛋白质，SDS什么的。我以前大量提取的时候也遇到过这种情况。关于异丙醇会不会沉淀多糖啊，5sRNA的问题，我也不清楚，你可以上网查一下。
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19楼2011-04-03 12:14:37
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★ ★ ★
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1949stone(金币+4): 考虑epi 2011-04-21 12:58:23
楼主上图，提取得到的样品的电泳图，看看有没有什么RNA和DNA，别忘了点上两个ladder，λ 线性DNA用于指示青霉DNA，1kb DNA 用于指示RNA。当然，如果有经验了，就点上这两个中的一个就可以了。附上我的一张电泳图，第一个泳道是λ 线性DNA大概四十多KB，泳道2、3、4共三个是真菌基因组DNA，可以看得到在λ 线性DNA相似大小的地方有一条亮带，那就是真菌基因组DNA；在泳道前面部分有一大堆长长的是RNA。



[ Last edited by 冼亮淀粉酶 on 2011-4-15 at 23:58 ]
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
20楼2011-04-15 23:37:54
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