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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】怎么做都提不出DNA，请高手帮一下忙喽！！！！
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】怎么做都提不出DNA，请高手帮一下忙喽！！！！ 已有23人参与

怎么做都提不出DNA，请高手帮一下忙喽！！！！
我是从青霉菌里提的，开始用的SDS法，液氮研磨+500ul抽提缓冲液65℃水浴1h后，12000离心10min，加两次氯仿：异戊醇（24：1）后离心10Min,12000收集上清，加等体积异丙醇-20放置30min以上，13500离心，用75%乙醇洗无菌风吹干后加无菌水溶的，结果跑电泳只有RNA。然后做了好多次都这样。又换的氯化苄法，（液氮研磨0.1g+500ul缓液+125uLDE 10%SDS+300uL氯化苄，50℃，1h）做这个我连醋酸钠PH都调到5.2了，结果还是没有。就崩溃了,麻烦高手给指导一下！！！

[ Last edited by 1949stone on 2011-4-21 at 12:54 ]
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1楼 2011-03-28 18:52:28
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★ ★ ★
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1949stone(金币+4): 考虑epi 2011-04-21 12:58:23
楼主上图，提取得到的样品的电泳图，看看有没有什么RNA和DNA，别忘了点上两个ladder，λ 线性DNA用于指示青霉DNA，1kb DNA 用于指示RNA。当然，如果有经验了，就点上这两个中的一个就可以了。附上我的一张电泳图，第一个泳道是λ 线性DNA大概四十多KB，泳道2、3、4共三个是真菌基因组DNA，可以看得到在λ 线性DNA相似大小的地方有一条亮带，那就是真菌基因组DNA；在泳道前面部分有一大堆长长的是RNA。



[ Last edited by 冼亮淀粉酶 on 2011-4-15 at 23:58 ]
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
20楼2011-04-15 23:37:54
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zmw_520

禁虫 (小有名气)
★ ★
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1949stone(金币+1): 有理 2011-04-21 12:53:50
本帖内容被屏蔽
2楼2011-03-28 20:00:30
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河外生命

木虫 (小有名气)
★ ★
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1949stone(金币+1): 支持楼上 2011-04-21 12:54:04
说下实验细节，好让大家帮你分析
赞一下(2人) 回复此楼
事在人为
3楼2011-03-28 21:39:19
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 鬼笔坏坏 at 2011-03-28 18:52:28:

回复：我是从青霉菌里提的，开始用的SDS法，液氮研磨+500ul抽提缓冲液65℃水浴1h后，12000离心10min，加两次氯仿：异戊醇（24：1）后离心10Min,12000收集上清，加等体积异丙醇-20放置30min以上，13500离心，用75%乙醇洗无菌风吹干后加无菌水溶的，结果跑电泳只有RNA。然后做了好多次都这样。又换的氯化苄法，（液氮研磨0.1g+500ul缓液+125uLDE 10%SDS+300uL氯化苄，50℃，1h）做这个我连醋酸钠PH都调到5.2了，结果还是没有。就崩溃了,麻烦高手给指导一下！！！
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4楼2011-03-29 09:12:05
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