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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】怎么做都提不出DNA，请高手帮一下忙喽！！！！
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】怎么做都提不出DNA，请高手帮一下忙喽！！！！ 已有23人参与

怎么做都提不出DNA，请高手帮一下忙喽！！！！
我是从青霉菌里提的，开始用的SDS法，液氮研磨+500ul抽提缓冲液65℃水浴1h后，12000离心10min，加两次氯仿：异戊醇（24：1）后离心10Min,12000收集上清，加等体积异丙醇-20放置30min以上，13500离心，用75%乙醇洗无菌风吹干后加无菌水溶的，结果跑电泳只有RNA。然后做了好多次都这样。又换的氯化苄法，（液氮研磨0.1g+500ul缓液+125uLDE 10%SDS+300uL氯化苄，50℃，1h）做这个我连醋酸钠PH都调到5.2了，结果还是没有。就崩溃了,麻烦高手给指导一下！！！

[ Last edited by 1949stone on 2011-4-21 at 12:54 ]
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1楼 2011-03-28 18:52:28
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-04-20 23:15:15:
所以我认为苯酚应该加，除非有什么我现在还不知道的特殊要求。

我用苯酚来着啊，我想问一下，是不是我得试剂出问题了啊？？像苯酚氯仿要避光啊。什么的。我自己分析，既然有RNA就说我破壁没问题，问题就在DNA释放以后是不是溶解，还有就是在纯化上面了对吗。那第一步，在水浴以后离心的速度跟温度有没有很大的影响啊??4℃不会太低吧，不过后来我把温度调到20℃。


我真的很想很想很想看看你们是怎么做的，从来没看过别人做！！！！！
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32楼2011-04-21 12:53:56
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zmw_520

禁虫 (小有名气)
★ ★
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1949stone(金币+1): 有理 2011-04-21 12:53:50
本帖内容被屏蔽
2楼2011-03-28 20:00:30
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河外生命

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 支持楼上 2011-04-21 12:54:04
说下实验细节，好让大家帮你分析
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事在人为
3楼2011-03-28 21:39:19
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 鬼笔坏坏 at 2011-03-28 18:52:28:

回复：我是从青霉菌里提的，开始用的SDS法，液氮研磨+500ul抽提缓冲液65℃水浴1h后，12000离心10min，加两次氯仿：异戊醇（24：1）后离心10Min,12000收集上清，加等体积异丙醇-20放置30min以上，13500离心，用75%乙醇洗无菌风吹干后加无菌水溶的，结果跑电泳只有RNA。然后做了好多次都这样。又换的氯化苄法，（液氮研磨0.1g+500ul缓液+125uLDE 10%SDS+300uL氯化苄，50℃，1h）做这个我连醋酸钠PH都调到5.2了，结果还是没有。就崩溃了,麻烦高手给指导一下！！！
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4楼2011-03-29 09:12:05
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