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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】怎么做都提不出DNA,请高手帮一下忙喽!!!! 已有23人参与

怎么做都提不出DNA,请高手帮一下忙喽!!!!
我是从青霉菌里提的,开始用的SDS法,液氮研磨+500ul抽提缓冲液65℃水浴1h后,12000离心10min,加两次氯仿:异戊醇(24:1)后离心10Min,12000收集上清,加等体积异丙醇-20放置30min以上,13500离心,用75%乙醇洗无菌风吹干后加无菌水溶的,结果跑电泳只有RNA。然后做了好多次都这样。又换的氯化苄法,(液氮研磨0.1g+500ul缓液+125uLDE 10%SDS+300uL氯化苄,50℃,1h)做这个我连醋酸钠PH都调到5.2了,结果还是没有。就崩溃了,麻烦高手给指导一下!!!

[ Last edited by 1949stone on 2011-4-21 at 12:54 ]
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另一个天堂

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 和楼上一样 2011-04-21 12:55:06
首先考虑是细胞破碎。如果没问题,可以用乙醇代替异丙醇沉淀DNA,沉淀时间延长
8楼2011-03-29 22:11:27
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zmw_520

禁虫 (小有名气)

★ ★
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1949stone(金币+1): 有理 2011-04-21 12:53:50
本帖内容被屏蔽

2楼2011-03-28 20:00:30
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河外生命

木虫 (小有名气)

★ ★
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1949stone(金币+1): 支持楼上 2011-04-21 12:54:04
说下实验细节,好让大家帮你分析
事在人为
3楼2011-03-28 21:39:19
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 鬼笔坏坏 at 2011-03-28 18:52:28:

回复:我是从青霉菌里提的,开始用的SDS法,液氮研磨+500ul抽提缓冲液65℃水浴1h后,12000离心10min,加两次氯仿:异戊醇(24:1)后离心10Min,12000收集上清,加等体积异丙醇-20放置30min以上,13500离心,用75%乙醇洗无菌风吹干后加无菌水溶的,结果跑电泳只有RNA。然后做了好多次都这样。又换的氯化苄法,(液氮研磨0.1g+500ul缓液+125uLDE 10%SDS+300uL氯化苄,50℃,1h)做这个我连醋酸钠PH都调到5.2了,结果还是没有。就崩溃了,麻烦高手给指导一下!!!
4楼2011-03-29 09:12:05
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