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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 【求助/交流】BamHI酶切
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liulanhua

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】BamHI酶切 已有15人参与

我用Takara的BamHI酶按照说明书上的反应液在30℃下切2小时，没能切成功。
我的质粒中含有BamHI和NdeI酶切位点。
图中第一个是Marker，第二个是没有进行酶切的质粒，第三个和第四个是用BamHI酶切后的条带，第五个是用NdeI酶切的条带，用NdeI酶切能切成功，但BamHI酶切好像没把质粒切开。请各位大侠帮忙分析下。
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努力会有收获！
1楼 2011-03-28 10:58:39
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★
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rainwander(金币+2): 说的很好~~~ 2011-03-28 17:46:30
问题:
1:你的质粒上面几个BamHI酶切位点，NdeI呢？
2：你的胶配的不太好，好多气泡！
3：你的marker怎么跑出来是这样子?最大多少。从上到下依次多大？

建议以后提问的时候把问题说清，这样才便于大家给你解决问题！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-03-28 15:22:04
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liulanhua

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-03-28 15:22:04:
问题:
1:你的质粒上面几个BamHI酶切位点，NdeI呢？
2：你的胶配的不太好，好多气泡！
3：你的marker怎么跑出来是这样子?最大多少。从上到下依次多大？

建议以后提问的时候把问题说清，这样才便于大家给你解 ...

质粒上是一个BamHI酶切位点，一个NdeI酶切位点。那气泡不是胶上的，是胶下面垫了一层塑料纸，胶跟塑料之间的气泡。我的Marker从上到下依次是11849bp，10085bp，8023bp，6133bp，5026bp，3997bp，3049bp，2087bp。质粒本身大小是5.4kb
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努力会有收获！
3楼2011-03-28 16:19:05
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★
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amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-03-28 20:14:43
引用回帖:
Originally posted by liulanhua at 2011-03-28 16:19:05:
质粒上是一个BamHI酶切位点，一个NdeI酶切位点。那气泡不是胶上的，是胶下面垫了一层塑料纸，胶跟塑料之间的气泡。我的Marker从上到下依次是11849bp，10085bp，8023bp，6133bp，5026bp，3997bp，3049bp，2087bp ...

那有可能是你没有切开，建议重新酶切试试，酶切时间可以稍微长一些！

还有你的marker怎么那么奇怪呢？为什么都不是整数？

你的条带拖尾太严重了，上样可以少一些！
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4楼2011-03-28 16:36:59
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liulanhua

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-03-28 16:36:59:
那有可能是你没有切开，建议重新酶切试试，酶切时间可以稍微长一些！

还有你的marker怎么那么奇怪呢？为什么都不是整数？

你的条带拖尾太严重了，上样可以少一些！

我还跑了双酶切的，是过夜酶切，也只有NdeI能切开。那时间可不短了啊？我看有人说酶切时间长的话也不好。会不会切开之后又连接上呢？这种酶你用过吗？它有什么特殊要求吗？
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努力会有收获！
5楼2011-03-28 16:41:51
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
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引用回帖:
Originally posted by liulanhua at 2011-03-28 16:41:51:
我还跑了双酶切的，是过夜酶切，也只有NdeI能切开。那时间可不短了啊？我看有人说酶切时间长的话也不好。会不会切开之后又连接上呢？这种酶你用过吗？它有什么特殊要求吗？

BamHI 我用过，完全没有问题的，buffer没有什么问题吧？你可以再尝试着酶切一下！
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6楼2011-03-28 16:47:28
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liulanhua

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-03-28 16:47:28:
BamHI 我用过，完全没有问题的，buffer没有什么问题吧？你可以再尝试着酶切一下！

用的buffer是takara的，应该没问题，那我就延长时间试试吧。谢了
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7楼2011-03-28 16:55:23
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)

优秀版主
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amisking(金币+3): 鼓励发帖交流。 2011-03-28 20:14:51
按理说，

BamH I是很常用的酶，应该没什么问题，

从电泳图来看，肯定是没有切开，

仔细确认一下酶切体系吧
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千万不要因为走的太久，而忘记了我们为什么出发~~~~~~ForDream~~~~~~
8楼2011-03-28 17:49:04
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沙中清泉

木虫 (正式写手)
★
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BamHI我也用过，应该没问题，质粒少加一点试试
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9楼2011-03-28 19:56:14
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zmw_520

禁虫 (小有名气)
★ ★
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scelab(金币+1): 谢谢交流 2011-03-28 23:03:22
本帖内容被屏蔽
10楼2011-03-28 23:02:25
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