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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 【求助/交流】BamHI酶切
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zmw_520

禁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
本帖内容被屏蔽
11楼2011-03-28 23:09:08
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liulanhua

金虫 (正式写手)
多谢多谢！
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努力会有收获！
12楼2011-03-29 08:48:25
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didillytao

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2): 有可能 2011-03-29 12:13:49
scelab(金币+2): 有可能 2011-03-29 12:14:30
弱弱问一句,你确定你的质粒有BamH1位点吗,takara的酶用的还挺多的,除非是酶有降解或者质粒本身有问题吧,我们两个小时切得相当完全啊...
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小鹿~~
13楼2011-03-29 08:56:58
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scienzyme

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1): 谢谢交流 2011-03-29 12:13:58
两个小时BamHI肯定能切开的。我怀疑楼主的质粒有问题，没有BamHI的识别序列。
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14楼2011-03-29 09:00:35
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雪中送炭

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2): 谢谢交流 2011-03-29 12:14:07
酶没有失活吧？换一支试试看，另外仔细核对一下buffer，还有DNA尽量纯，杂质会影响酶切效果！另外要注意BaH1有星活性！
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期待漂亮的数据和漂亮的文章！
15楼2011-03-29 09:13:45
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summit_power

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
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scelab(金币+3): 鼓励新虫 2011-03-29 12:14:17
你是分别单酶切还是一起切的？如果一起切TAKARA的Buffer表，使用两个酶效率最高的Buffer，既然第二个酶可以，推测是Buffer的问题
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16楼2011-03-29 10:29:23
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liulanhua

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 沙中清泉 at 2011-03-28 19:56:14:
BamHI我也用过，应该没问题，质粒少加一点试试

请问我要是两种酶进行双酶切的话，是应该先用一种酶切，然后再直接加入另一种酶进行酶切；还是先用一种酶切，胶回收后再用另一种酶进行酶切；还是可以两种酶同时加入一种缓冲液直接进行双酶切？
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努力会有收获！
17楼2011-03-29 11:21:03
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沙中清泉

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2): 谢谢交流 2011-03-29 12:14:30
引用回帖:
Originally posted by liulanhua at 2011-03-29 11:21:03:
请问我要是两种酶进行双酶切的话，是应该先用一种酶切，然后再直接加入另一种酶进行酶切；还是先用一种酶切，胶回收后再用另一种酶进行酶切；还是可以两种酶同时加入一种缓冲液直接进行双酶切？

可以查一下Takara产品目录，上面有关于哪两种酶可以同时切，以及同时切需要哪些Buffer，同时切比单切好。若你的两个酶不能同时切那只能先切一个回收后再切另一个。
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18楼2011-03-29 11:53:14
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alanine

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by didillytao at 2011-03-29 08:56:58:
弱弱问一句,你确定你的质粒有BamH1位点吗,takara的酶用的还挺多的,除非是酶有降解或者质粒本身有问题吧,我们两个小时切得相当完全啊...

正解，lz的质粒有问题，可以测序看看是不是BamHI的位点在不？
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交更多的朋友！！
19楼2011-03-29 12:25:45
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wjw992008

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
会不会受到甲基化修饰基团的影响？
建议查看一下BamHI的说明书。
这个酶相当好用，用了两年无数遍从来没有失败过~~
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20楼2011-03-29 12:48:17
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