应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】做过RT-PCR的请进
131/1返回列表
查看: 2756  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

houhoujiayou

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】做过RT-PCR的请进

大家好，我因为新近才换课题，要提mRNA做反转录，因为实验室没有人做过，不知道试验中应该注意什么，还有都要用到什么试剂盒什么酶？请做过的人降一下我也好让老师早点买试剂盒和酶啊，先谢谢了啊。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-03-14 09:01:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nininini

银虫 (小有名气)
★ ★
houhoujiayou(金币+5): 谢谢MM了，但是不是很明白，要DNase消化是为什么啊？另外为什么说“只做反转录”啊，还有其他的操作目的吗？我是要把酵母的基因反P出来后做表达的啊，MM做过的话可以说的详细点吗？谢谢了啊 2011-03-14 09:16:09
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-03-14 09:26:11
如果是只做反转录的话只需要提取RNA、DNase消化和反转录酶了，根据实验室情况RNA提取可以用试剂盒也可以用其它试剂提取，DNase和反转录酶也都差不多了，找平时经常使用试剂的厂家应该问题不大了吧，天根、生工什么的应该都没问题吧
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-03-14 09:08:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weishengsu5

木虫 (正式写手)
houhoujiayou(金币+3): 这个我听说过了，说要用什么溶液把所有要用的仪器泡一下，那基本上要买什么试剂盒和酶啊，能把操作步骤详细讲一下嘛？虽然看过理论，可是实际做起来还是无从下手，咳 2011-03-14 09:25:30
引用回帖:
Originally posted by houhoujiayou at 2011-03-14 09:01:37:
大家好，我因为新近才换课题，要提mRNA做反转录，因为实验室没有人做过，不知道试验中应该注意什么，还有都要用到什么试剂盒什么酶？请做过的人降一下我也好让老师早点买试剂盒和酶啊，先谢谢了啊。

在提取mRNA中注意他是很容易降解的，自然环境中都存在着核酸酶，所以提取过程中注意下
赞一下 回复此楼
3楼2011-03-14 09:17:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weishengsu5

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by nininini at 2011-03-14 09:08:21:
如果是只做反转录的话只需要提取RNA、DNase消化和反转录酶了，根据实验室情况RNA提取可以用试剂盒也可以用其它试剂提取，DNase和反转录酶也都差不多了，找平时经常使用试剂的厂家应该问题不大了吧，天根、生工什么 ...

你是研究什么代谢的，我们课题组也是代谢方向的
赞一下 回复此楼
4楼2011-03-14 09:22:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

houhoujiayou

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by weishengsu5 at 2011-03-14 09:22:28:
你是研究什么代谢的，我们课题组也是代谢方向的

我是做一个基因的克隆表达，之前的课题做不出来，临时换了一个，具体怎么操作我都不明白，急啊
赞一下 回复此楼
5楼2011-03-14 09:27:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangzhiang

铁杆木虫 (正式写手)
houhoujiayou(金币+1): 嗯哪，谢谢了啊，我再看看操作书吧 2011-03-14 10:05:35
houhoujiayou(金币+1): 2011-03-16 12:01:17
还是没明白，是从来没接触过，还是试验遇到困难，实在不知道怎么办先看看分子克隆手册，或者别人的论文，熟悉下流程，需要什么试剂好说吧，我觉得MBI和TAKALA的不错
赞一下 回复此楼
6楼2011-03-14 09:51:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaoxianfeng

金虫 (初入文坛)
★
silicare(金币+1): 谢谢参与 2011-03-14 11:50:57
houhoujiayou(金币+1): 2011-03-16 12:01:22
引用回帖:
Originally posted by houhoujiayou at 2011-03-14 09:01:37:
大家好，我因为新近才换课题，要提mRNA做反转录，因为实验室没有人做过，不知道试验中应该注意什么，还有都要用到什么试剂盒什么酶？请做过的人降一下我也好让老师早点买试剂盒和酶啊，先谢谢了啊。

1.提RNA，防降解
2.rt，反转RNA得出cDNA
3.用cDNA做模板进行PCR，我们用宝生物的试剂盒做的
4.1%电泳检测，照相。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-03-14 10:37:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangxn2010

木虫 (著名写手)
houhoujiayou(金币+1): 2011-03-16 12:01:25
这个先得把分子克隆实验指导看一遍(相关方面），那样会比较全面，如果实验中遇到问题，来这里求助会比较好，祝实验顺利！
赞一下 回复此楼
8楼2011-03-14 11:35:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

没有眼泪

铜虫 (初入文坛)
houhoujiayou(金币+1): 2011-03-16 12:01:28
1.提取总RNA，跑胶看一下质量
2.RT-PCR，一般用Olig-dT转录出cDNA（我们用的是东洋舫的盒子）
再进行后续实验
赞一下 回复此楼
9楼2011-03-14 14:39:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tingspdf

至尊木虫 (著名写手)
houhoujiayou(金币+1): 2011-03-16 12:01:32
看分子克隆吧，那上面是最全的
赞一下 回复此楼
10楼2011-03-14 16:00:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nininini

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by weishengsu5 at 2011-03-14 09:22:28:
你是研究什么代谢的，我们课题组也是代谢方向的

我们也差不多啦~
赞一下 回复此楼
11楼2011-03-15 17:28:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nininini

银虫 (小有名气)
houhoujiayou(金币+1): 谢谢 2011-03-22 20:57:24
引用回帖:
Originally posted by nininini at 2011-03-14 09:08:21:
如果是只做反转录的话只需要提取RNA、DNase消化和反转录酶了，根据实验室情况RNA提取可以用试剂盒也可以用其它试剂提取，DNase和反转录酶也都差不多了，找平时经常使用试剂的厂家应该问题不大了吧，天根、生工什么 ...

DNase的目的是进一步消化未完全除尽的DNA，如果只是表达的话不用定量之类的相对要求低一点儿，只要能P出产物就好了~
赞一下 回复此楼
12楼2011-03-15 17:31:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mxlo.o

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by 没有眼泪 at 2011-03-14 14:39:41:
1.提取总RNA，跑胶看一下质量
2.RT-PCR，一般用Olig-dT转录出cDNA（我们用的是东洋舫的盒子）
再进行后续实验

我用一种真菌提取出RNA后进行了反转录，其中1kb左右的片段提取出来了，但是2kb左右的片段怎么也扩增不出来。我的问题是1kb的能扩出来是否证明我提取的RNA没有问题，如果这样的话，哪2kb的为什么扩增不出来？
赞一下(1人) 回复此楼
13楼2011-12-09 22:19:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 houhoujiayou 的主题更新
131/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[职场人生] 40+中年人失业后，还能找到好工作吗？ +11 xqy2009 2026-10-13 13/650 2026-10-15 21:32 by bear2007
[有机交流] 用NBS溴化时溶剂除了CCl4外还有什么 +3 18834002860 2026-10-12 6/300 2026-10-15 14:30 by 长沙摩尔信息科�
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗？ 200+7 David1982 2026-10-13 11/550 2026-10-15 10:30 by zyqchem
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +11 Isak0320 2026-10-12 15/750 2026-10-14 21:55 by 猫鱼不是鱼
[论文投稿] 二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores 10+3 纳斯达克ML 2026-10-11 4/200 2026-10-14 17:30 by babero
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +8 wangyl_123 2026-10-10 13/650 2026-10-14 15:12 by zuesli
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +4 好运来～9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭