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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】做过RT-PCR的请进
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houhoujiayou

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】做过RT-PCR的请进

大家好，我因为新近才换课题，要提mRNA做反转录，因为实验室没有人做过，不知道试验中应该注意什么，还有都要用到什么试剂盒什么酶？请做过的人降一下我也好让老师早点买试剂盒和酶啊，先谢谢了啊。
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1楼 2011-03-14 09:01:37
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mxlo.o

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by 没有眼泪 at 2011-03-14 14:39:41:
1.提取总RNA，跑胶看一下质量
2.RT-PCR，一般用Olig-dT转录出cDNA（我们用的是东洋舫的盒子）
再进行后续实验

我用一种真菌提取出RNA后进行了反转录，其中1kb左右的片段提取出来了，但是2kb左右的片段怎么也扩增不出来。我的问题是1kb的能扩出来是否证明我提取的RNA没有问题，如果这样的话，哪2kb的为什么扩增不出来？
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13楼2011-12-09 22:19:44
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nininini

银虫 (小有名气)
★ ★
houhoujiayou(金币+5): 谢谢MM了，但是不是很明白，要DNase消化是为什么啊？另外为什么说“只做反转录”啊，还有其他的操作目的吗？我是要把酵母的基因反P出来后做表达的啊，MM做过的话可以说的详细点吗？谢谢了啊 2011-03-14 09:16:09
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-03-14 09:26:11
如果是只做反转录的话只需要提取RNA、DNase消化和反转录酶了，根据实验室情况RNA提取可以用试剂盒也可以用其它试剂提取，DNase和反转录酶也都差不多了，找平时经常使用试剂的厂家应该问题不大了吧，天根、生工什么的应该都没问题吧
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2楼2011-03-14 09:08:21
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weishengsu5

木虫 (正式写手)
houhoujiayou(金币+3): 这个我听说过了，说要用什么溶液把所有要用的仪器泡一下，那基本上要买什么试剂盒和酶啊，能把操作步骤详细讲一下嘛？虽然看过理论，可是实际做起来还是无从下手，咳 2011-03-14 09:25:30
引用回帖:
Originally posted by houhoujiayou at 2011-03-14 09:01:37:
大家好，我因为新近才换课题，要提mRNA做反转录，因为实验室没有人做过，不知道试验中应该注意什么，还有都要用到什么试剂盒什么酶？请做过的人降一下我也好让老师早点买试剂盒和酶啊，先谢谢了啊。

在提取mRNA中注意他是很容易降解的，自然环境中都存在着核酸酶，所以提取过程中注意下
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3楼2011-03-14 09:17:55
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weishengsu5

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by nininini at 2011-03-14 09:08:21:
如果是只做反转录的话只需要提取RNA、DNase消化和反转录酶了，根据实验室情况RNA提取可以用试剂盒也可以用其它试剂提取，DNase和反转录酶也都差不多了，找平时经常使用试剂的厂家应该问题不大了吧，天根、生工什么 ...

你是研究什么代谢的，我们课题组也是代谢方向的
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4楼2011-03-14 09:22:28
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