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【求助/交流】看一下我做的蛋白质是不是变性了
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dreamshaker
铜虫
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虫号: 1164834
[交流]
【求助/交流】看一下我做的蛋白质是不是变性了
我做的是从提取动物肝脏中的细胞色素c,在最后一步三氯乙酸处理离心后有白色沉
淀,除去了部分的清液,大概有三分之二,因为要做透析,透析袋容量有限就没有加
去离子水,透析过夜后发现有些浑浊的白絮状不均匀存在,不知道是不是已经变性
了,老师说三氯乙酸的变性沉淀是可逆的,有好些同学做的是深红色沉淀极少,我的
浅红色,是不是也可能存在浓度太大析出的可能呢?
我测了520nm,吸光度比其他组做的要大很多,蛋白质变性以后是不是在比较宽的区
间内比如100nm的跨度吸光度的增长都会很明显啊,还是只在原有的最强吸光度上有
所增加呢?
[
Last edited by dreamshaker on 2011-3-14 at 20:27
]
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2011-03-12 22:48:04
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dreamshaker
铜虫
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求各位了,给看一下
谢谢了
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2楼
2011-03-12 23:07:36
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铜虫
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我晕,这个问题很难吗?
引用回帖:
Originally posted by
dreamshaker
at 2011-03-12 23:07:36:
谢谢了
真的很难吗?
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2011-03-12 23:24:50
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zhengfan1109
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dreamshaker(金币+2): 2011-03-14 20:23:05
dreamshaker(金币+2): 2011-03-14 20:58:39
你可以测定离心之后和不离心的蛋白活性,实验结果出来才知道活性还存在没有。
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4楼
2011-03-13 00:28:37
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wqj1988926
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dreamshaker(金币+2): 2011-03-14 20:22:47
dreamshaker(金币+2): 2011-03-14 21:00:58
是不是浓度太大导致蛋白析出,还有楼主的储存条件最好说明一下,给大家参考下
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5楼
2011-03-13 09:41:51
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labrat
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dreamshaker(金币+1): 我测的是细胞色素c,用可见光分光测的 2011-03-14 20:24:45
dreamshaker(金币+2): 2011-03-14 21:01:45
general guide:
1. test A260/280/254nm (280> better)
2. test active (protein active good)
3. test microb (contaminated with microb, better discard)
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6楼
2011-03-13 10:07:43
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谢谢楼上的三位了
真无奈,生化学了那么多,蛋白质溶液的性状空白啊
[
Last edited by dreamshaker on 2011-3-14 at 21:00
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7楼
2011-03-14 20:21:46
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dreamshaker
铜虫
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Originally posted by
zhengfan1109
at 2011-03-13 00:28:37:
你可以测定离心之后和不离心的蛋白活性,实验结果出来才知道活性还存在没有。
离心之前用三氯乙酸处理了,是浑浊但比较均一的状态,离心之后是白色沉淀,老师说这是纯度高的体现,但越往后做我越是怀疑了
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8楼
2011-03-14 20:59:34
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