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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】看一下我做的蛋白质是不是变性了
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dreamshaker

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】看一下我做的蛋白质是不是变性了

我做的是从提取动物肝脏中的细胞色素c，在最后一步三氯乙酸处理离心后有白色沉

淀，除去了部分的清液，大概有三分之二，因为要做透析，透析袋容量有限就没有加

去离子水，透析过夜后发现有些浑浊的白絮状不均匀存在，不知道是不是已经变性

了，老师说三氯乙酸的变性沉淀是可逆的，有好些同学做的是深红色沉淀极少，我的

浅红色，是不是也可能存在浓度太大析出的可能呢？

我测了520nm，吸光度比其他组做的要大很多，蛋白质变性以后是不是在比较宽的区

间内比如100nm的跨度吸光度的增长都会很明显啊，还是只在原有的最强吸光度上有

所增加呢？

[ Last edited by dreamshaker on 2011-3-14 at 20:27 ]
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1楼 2011-03-12 22:48:04
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dreamshaker

铜虫 (正式写手)

求各位了，给看一下

谢谢了
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2楼2011-03-12 23:07:36
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dreamshaker

铜虫 (正式写手)

我晕，这个问题很难吗？

引用回帖:
Originally posted by dreamshaker at 2011-03-12 23:07:36:
谢谢了

真的很难吗？
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3楼2011-03-12 23:24:50
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zhengfan1109

银虫 (正式写手)
dreamshaker(金币+2): 2011-03-14 20:23:05
dreamshaker(金币+2): 2011-03-14 20:58:39
你可以测定离心之后和不离心的蛋白活性，实验结果出来才知道活性还存在没有。
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4楼2011-03-13 00:28:37
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
dreamshaker(金币+2): 2011-03-14 20:22:47
dreamshaker(金币+2): 2011-03-14 21:00:58
是不是浓度太大导致蛋白析出，还有楼主的储存条件最好说明一下，给大家参考下
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5楼2011-03-13 09:41:51
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labrat

木虫 (著名写手)
dreamshaker(金币+1): 我测的是细胞色素c，用可见光分光测的 2011-03-14 20:24:45
dreamshaker(金币+2): 2011-03-14 21:01:45
general guide:
1. test A260/280/254nm (280> better)
2. test active (protein active good)
3. test microb (contaminated with microb, better discard)
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6楼2011-03-13 10:07:43
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dreamshaker

铜虫 (正式写手)

谢谢楼上的三位了

真无奈，生化学了那么多，蛋白质溶液的性状空白啊

[ Last edited by dreamshaker on 2011-3-14 at 21:00 ]
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7楼2011-03-14 20:21:46
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dreamshaker

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zhengfan1109 at 2011-03-13 00:28:37:
你可以测定离心之后和不离心的蛋白活性，实验结果出来才知道活性还存在没有。

离心之前用三氯乙酸处理了，是浑浊但比较均一的状态，离心之后是白色沉淀，老师说这是纯度高的体现，但越往后做我越是怀疑了
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8楼2011-03-14 20:59:34
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