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enchxl

铁虫 (初入文坛)


[交流] 【求助/交流】蛋白纯化

有没有谁做过His-tag的蛋白纯化,最近我们纯化后杂带比较多,而且有的浓度特别高,目的蛋白的带却比较淡,不知为什么,请高手赐教。万分感谢。
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★ ★ ★
lstt09nk(金币+3): 鼓励交流 2011-02-19 13:06:53

优化一下各个步骤,同时做好虽然效果更好,但仍不能完全纯化的准备,这个标签运气好的话可以一步纯化,也不是每一次的运气都好的。再过一次离子交换和疏水层析效果也会好很多的,分子筛就别想了,分离效果不大好的,样品还要浓缩,搞几下预处理一不小心酶就不剩多少了。倒是离子交换和疏水层析的酶活力回收率很高。
3楼2011-02-19 12:56:32
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1949stone(金币+1): 鼓励交流 2011-02-19 11:41:45

要先预洗除去吸附能力弱的杂蛋白,还可能是蛋白降解的缘故。
2楼2011-02-19 11:33:56
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ruth_3912834

铜虫 (小有名气)



rainwander(金币+1): 鼓励积极参与~~~ 2011-02-19 16:47:31

首先是Ni柱再生,你可以将它彻底再生一次;另外,杂蛋白多有可能是杂蛋白需要用更高浓度的咪唑来洗脱,相应目的蛋白洗脱浓度就会更高,你可以试试。
4楼2011-02-19 16:38:00
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xhjggl

木虫 (正式写手)



先用做低浓度梯度的咪唑洗涤,看看在何种浓度可以去杂带,在用高浓度咪唑洗脱
可以到上海生工网站上查找相关说明书看看
5楼2011-02-20 12:40:38
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