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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白纯化
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enchxl

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】蛋白纯化

有没有谁做过His-tag的蛋白纯化，最近我们纯化后杂带比较多，而且有的浓度特别高，目的蛋白的带却比较淡，不知为什么，请高手赐教。万分感谢。
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1楼 2011-02-19 11:01:00
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★ ★ ★
lstt09nk(金币+3): 鼓励交流 2011-02-19 13:06:53

优化一下各个步骤，同时做好虽然效果更好，但仍不能完全纯化的准备，这个标签运气好的话可以一步纯化，也不是每一次的运气都好的。再过一次离子交换和疏水层析效果也会好很多的，分子筛就别想了，分离效果不大好的，样品还要浓缩，搞几下预处理一不小心酶就不剩多少了。倒是离子交换和疏水层析的酶活力回收率很高。
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3楼2011-02-19 12:56:32
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
1949stone(金币+1): 鼓励交流 2011-02-19 11:41:45

要先预洗除去吸附能力弱的杂蛋白，还可能是蛋白降解的缘故。
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2楼2011-02-19 11:33:56
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ruth_3912834

铜虫 (小有名气)
★
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与~~~ 2011-02-19 16:47:31

首先是Ni柱再生，你可以将它彻底再生一次；另外，杂蛋白多有可能是杂蛋白需要用更高浓度的咪唑来洗脱，相应目的蛋白洗脱浓度就会更高，你可以试试。
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4楼2011-02-19 16:38:00
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xhjggl

木虫 (正式写手)

先用做低浓度梯度的咪唑洗涤，看看在何种浓度可以去杂带，在用高浓度咪唑洗脱
可以到上海生工网站上查找相关说明书看看
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5楼2011-02-20 12:40:38
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