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zhouheyi_2

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 62.6
帖子: 102
在线: 21.7小时
虫号: 1060744

[交流] 【求助/交流】TAIL PCR第二轮在1kb以上弥散，怎么回事？

TAIL PCR在第二轮在1kb以上弥散，怎么回事？
宁外TAIL PCR的引物除了刘上要求的还有没有别的要求啊？

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1楼 2011-01-20 08:28:55

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cake2008

木虫 (正式写手)

应助: 29 (小学生)
金币: 1515.9
帖子: 825
在线: 330.4小时
虫号: 430849

★
zhouheyi_2(金币+1):谢谢参与
zhouheyi_2(金币+2): 2011-03-07 22:17:17

你是搞动物的还是植物的？
把产物梯度稀释10倍和100倍，再用引物进行第三轮PCR扩增，第三轮的程序按照第二轮的程序进行。TAIL-PCR扩增的片段不会特别长，200-1000bp吧。
如果还是不行，可以更换引物，或者试试其他方法，前几天站内的朋友讲了一个新方法，
.P. Acevedo, F. Reyes, L.P. Parra, O. Salazar, B.A. Andrews, J.A. Asenjo, Cloning of complete genes for novel hydrolytic enzymes from Antarctic sea water bacteria by use of an improved genome walking technique, Journal of Biotechnology 133 (2008) 277-286.
你可以试试，因为我现在没有做，所以如果你试了的话，也请你来分享一下经验。