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zhouheyi_2

铁虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】TAIL PCR第二轮在1kb以上弥散,怎么回事?

TAIL PCR在第二轮在1kb以上弥散,怎么回事?
宁外TAIL PCR的引物除了刘上要求的还有没有别的要求啊?
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)



zhouheyi_2(金币+1):谢谢参与
zhouheyi_2(金币+1): 2011-03-07 22:16:42
这都是嘛字啊

建议:把pcr产物稀释一下,再用引物继续第三轮pcr
2楼2011-01-21 00:09:10
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cake2008

木虫 (正式写手)



zhouheyi_2(金币+1):谢谢参与
zhouheyi_2(金币+2): 2011-03-07 22:17:17
你是搞动物的还是植物的?
把产物梯度稀释10倍和100倍,再用引物进行第三轮PCR扩增,第三轮的程序按照第二轮的程序进行。TAIL-PCR扩增的片段不会特别长,200-1000bp吧。
如果还是不行,可以更换引物,或者试试其他方法,前几天站内的朋友讲了一个新方法,
.P. Acevedo, F. Reyes, L.P. Parra, O. Salazar, B.A. Andrews, J.A. Asenjo, Cloning of complete genes for novel hydrolytic enzymes from Antarctic sea water bacteria by use of an improved genome walking technique, Journal of Biotechnology 133 (2008) 277-286.
你可以试试,因为我现在没有做,所以如果你试了的话,也请你来分享一下经验。
3楼2011-01-21 11:32:24
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