24小时热门版块排行榜

返回列表

竹林江南

铜虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 271
帖子: 113
在线: 55.2小时
虫号: 1180984

[交流] 【求助/交流】菌落PCR问题

问一下，我想构建16s rRNA基因文库。DNA提取、PCR扩增（引物27f，1492r，产生片段约1500bp）纯化都没有问题，连接载体pMDT19，连接后转化、涂布平板有单克隆出来，但做菌落PCR时最多只有200bp的结果出来，是什么原因呢？
构建另外一个目的基因克隆文库，同样的操作步骤，只是另外一对引物扩增出的是500bp产物，克隆后菌落pcr能够成功。

回复此楼

» 猜你喜欢

请教限项目规定已经有5人回复
拟解决的关键科学问题还要不要写已经有8人回复
最失望的一年已经有16人回复
存款400万可以在学校里躺平吗已经有33人回复
求助一下有机合成大神已经有3人回复
求推荐英文EI期刊已经有5人回复
26申博已经有3人回复
基金委咋了？2026年的指南还没有出来？已经有10人回复
基金申报已经有6人回复
疑惑？已经有5人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

菌落PCR筛选已经有17人回复
pfu扩增，菌液PCR问题已经有4人回复
菌落PCR无条带已经有19人回复
克隆过程出现的问题已经有7人回复
关于转化、菌落PCR 已经有8人回复
TA克隆遇到的问题已经有10人回复
【求助/交流】菌落PCR求助已经有23人回复
【求助/交流】关于毕赤酵母电转后PCR验证问题已经有20人回复
【求助/交流】菌落PCR问题已经有23人回复
【求助/交流】有关菌液PCR的问题已经有14人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2011-01-18 15:57:23

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

犹寒

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 125.6
帖子: 30
在线: 19.3小时
虫号: 992720

竹林江南(金币+1): 2011-01-19 13:45:05

引用回帖:

Originally posted by 竹林江南 at 2011-01-18 15:57:23:
问一下，我想构建16s rRNA基因文库。DNA提取、PCR扩增（引物27f，1492r，产生片段约1500bp）纯化都没有问题，连接载体pMDT19，连接后转化、涂布平板有单克隆出来，但做菌落PCR时最多只有200bp的结果出来，是什么原 ...

我的也出现问题了，克隆出来，也pcr出来了条带，只是测不出序，很是郁闷。另外，引物27f，和1492r是什么引物，通用引物吗？主要p什么菌的？你的菌落PCR是怎么做的呢？有没有非特异性条带出现呢？