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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】引物Tm值很高，PCR求助
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ikaren2013

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】引物Tm值很高，PCR求助

由于要做点突变，且突变位置很特殊很特殊，（考虑到突变位置，引物3'端配对长度），所以只能针对突变点限定性地设计了几对引物。 软件给出的Tm值相当高。相对于以下的结果图
       第一对引物 Tm
      
       第二对引物 Tm
      
       第三对引物 Tm
      
       第四对引物 Tm
      
       摸条件四次结果，都非常不好，（也用过热启动，什么都没P出来，只有引物二聚体），急求解决方法.目的片段大小约为700bp
      

      

       下图能看到每个体系都有十分微弱的目的条带      
      

       下图中的1,2,3为两点温度法
      

[ Last edited by ikaren2013 on 2011-1-14 at 11:36 ]
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1楼 2011-01-13 22:09:58
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btx362237729

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
279232楼: Originally posted by xulanzzz at 2011-01-14 09:48:20
引物长度大于30bp的 退火温度不必参考软件上的TM。。。我的引物36bp，软件上面显示的退火温度高达80多度，50多度照样可以PCR。。。

本人也遇到高TM值的问题了 哈哈。。。看到这个觉得很鼓舞
赞一下 回复此楼
16楼2012-06-16 20:33:07
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