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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有人用TaKaRa的PrimeSTAR HS DNA Polymerase P长片段
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hutingting

银虫 (正式写手)

[求助] 有人用TaKaRa的PrimeSTAR HS DNA Polymerase P长片段

有人用TaKaRa的PrimeSTAR  HS DNA Polymerase PCR 2kb的片段吗？现在用这个酶P 2kb的片段，在10ul体系里P出目的条带，可是放大到50ul体系，就P不出来了，退火温度，模板量都优化了，也加入2%DMSO试了，效果都不好。问问大家P长片段都用什么酶，谢谢。
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1楼 2012-10-25 15:59:31
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hutingting: 金币+3, ★有帮助 2012-10-26 08:40:56
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-26 13:35:49
你为什么一定要用50ul体系呢？即使你要回收，你完全可以做5-6个10ul体系的啊，跑胶的时候一起点样就OK啦。
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持之以恒、永不放弃！
2楼2012-10-25 17:18:44
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mvvp

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hutingting: 金币+3, ★有帮助 2012-10-26 08:43:48
2kb 用PrimeSTAR足够了，不行的话考虑下LAtaq，用PrimeSTAR  HS有点浪费
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3楼2012-10-25 20:52:14
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mamadexiao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mvvp at 2012-10-25 20:52:14
2kb 用PrimeSTAR足够了，不行的话考虑下LAtaq，用PrimeSTAR  HS有点浪费

PrimeSTAR  HS一定能出么？
我原来用PFU能出的，但是酶没了，就蹭的别人的，相同条件，没出带。。。
哎
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4楼2012-10-25 21:08:58
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zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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hutingting: 金币+6, ★★★很有帮助 2012-10-26 08:44:44
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-10-26 13:36:02
1、我做的使用20ul体系，正常能够批出来2.8kb的片段，可以多做几管，合并使用即可，若要放大体系，请将酶的浓度降低，将dNTP的用量略减低。
2、如果模板没有比较特殊的序列或者结构，冷启动问题不大。
3、LAtaq也很好用，几k左右的都没问题。
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5楼2012-10-25 21:24:35
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hutingting

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-10-25 17:18:44
你为什么一定要用50ul体系呢？即使你要回收，你完全可以做5-6个10ul体系的啊，跑胶的时候一起点样就OK啦。

10ul体系P的很好，第二天就直接P了50ul的体系，条带就没了
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6楼2012-10-26 08:41:49
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hutingting

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mvvp at 2012-10-25 20:52:14
2kb 用PrimeSTAR足够了，不行的话考虑下LAtaq，用PrimeSTAR  HS有点浪费

我再试一次二次PCR，不行的话，就换成LAtaq
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7楼2012-10-26 08:44:27
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hutingting

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhwenxing at 2012-10-25 21:24:35
1、我做的使用20ul体系，正常能够批出来2.8kb的片段，可以多做几管，合并使用即可，若要放大体系，请将酶的浓度降低，将dNTP的用量略减低。
2、如果模板没有比较特殊的序列或者结构，冷启动问题不大。
3、LAtaq也 ...

放大体系不是相应比例的放大吗？为什么是降低酶和dNTP的浓度
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8楼2012-10-26 08:45:50
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植物园园长

金虫 (小有名气)
天根的Fast Hifi快速高保真酶很不错，4-5kb的片段 p的很容易，建议你试试。他们好像还有试用装，。
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在路上～～Marketing!
9楼2012-10-26 09:28:15
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植物园园长

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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hutingting: 金币+2, ★有帮助 2012-10-26 15:27:32
引用回帖:
7楼: Originally posted by hutingting at 2012-10-26 08:44:27
我再试一次二次PCR，不行的话，就换成LAtaq...

二次PCR多麻烦啊
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在路上～～Marketing!
10楼2012-10-26 09:29:02
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