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hutingting

银虫 (正式写手)

[求助] 有人用TaKaRa的PrimeSTAR HS DNA Polymerase P长片段

有人用TaKaRa的PrimeSTAR  HS DNA Polymerase PCR 2kb的片段吗?现在用这个酶P 2kb的片段,在10ul体系里P出目的条带,可是放大到50ul体系,就P不出来了,退火温度,模板量都优化了,也加入2%DMSO试了,效果都不好。问问大家P长片段都用什么酶,谢谢。
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by mvvp at 2012-10-25 20:52:14
2kb 用PrimeSTAR足够了,不行的话考虑下LAtaq,用PrimeSTAR  HS有点浪费

PrimeSTAR  HS一定能出么?
我原来用PFU能出的,但是酶没了,就蹭的别人的,相同条件,没出带。。。
4楼2012-10-25 21:08:58
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查看全部 10 个回答

gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
hutingting: 金币+3, 有帮助 2012-10-26 08:40:56
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-26 13:35:49
你为什么一定要用50ul体系呢?即使你要回收,你完全可以做5-6个10ul体系的啊,跑胶的时候一起点样就OK啦。
持之以恒、永不放弃!
2楼2012-10-25 17:18:44
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mvvp

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
hutingting: 金币+3, 有帮助 2012-10-26 08:43:48
2kb 用PrimeSTAR足够了,不行的话考虑下LAtaq,用PrimeSTAR  HS有点浪费
3楼2012-10-25 20:52:14
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zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
hutingting: 金币+6, ★★★很有帮助 2012-10-26 08:44:44
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-10-26 13:36:02
1、我做的使用20ul体系,正常能够批出来2.8kb的片段,可以多做几管,合并使用即可,若要放大体系,请将酶的浓度降低,将dNTP的用量略减低。
2、如果模板没有比较特殊的序列或者结构,冷启动问题不大。
3、LAtaq也很好用,几k左右的都没问题。
5楼2012-10-25 21:24:35
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