应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有人用TaKaRa的PrimeSTAR HS DNA Polymerase P长片段
101/1返回列表
查看: 2531  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hutingting

银虫 (正式写手)

[求助] 有人用TaKaRa的PrimeSTAR HS DNA Polymerase P长片段

有人用TaKaRa的PrimeSTAR  HS DNA Polymerase PCR 2kb的片段吗？现在用这个酶P 2kb的片段，在10ul体系里P出目的条带，可是放大到50ul体系，就P不出来了，退火温度，模板量都优化了，也加入2%DMSO试了，效果都不好。问问大家P长片段都用什么酶，谢谢。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-10-25 15:59:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hutingting: 金币+3, ★有帮助 2012-10-26 08:40:56
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-26 13:35:49
你为什么一定要用50ul体系呢？即使你要回收，你完全可以做5-6个10ul体系的啊，跑胶的时候一起点样就OK啦。
赞一下 回复此楼
持之以恒、永不放弃！
2楼2012-10-25 17:18:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mvvp

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hutingting: 金币+3, ★有帮助 2012-10-26 08:43:48
2kb 用PrimeSTAR足够了，不行的话考虑下LAtaq，用PrimeSTAR  HS有点浪费
赞一下 回复此楼
3楼2012-10-25 20:52:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mamadexiao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mvvp at 2012-10-25 20:52:14
2kb 用PrimeSTAR足够了，不行的话考虑下LAtaq，用PrimeSTAR  HS有点浪费

PrimeSTAR  HS一定能出么？
我原来用PFU能出的，但是酶没了，就蹭的别人的，相同条件，没出带。。。
哎
赞一下 回复此楼
4楼2012-10-25 21:08:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hutingting: 金币+6, ★★★很有帮助 2012-10-26 08:44:44
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-10-26 13:36:02
1、我做的使用20ul体系，正常能够批出来2.8kb的片段，可以多做几管，合并使用即可，若要放大体系，请将酶的浓度降低，将dNTP的用量略减低。
2、如果模板没有比较特殊的序列或者结构，冷启动问题不大。
3、LAtaq也很好用，几k左右的都没问题。
赞一下 回复此楼
5楼2012-10-25 21:24:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hutingting

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-10-25 17:18:44
你为什么一定要用50ul体系呢？即使你要回收，你完全可以做5-6个10ul体系的啊，跑胶的时候一起点样就OK啦。

10ul体系P的很好，第二天就直接P了50ul的体系，条带就没了
赞一下 回复此楼
6楼2012-10-26 08:41:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hutingting

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mvvp at 2012-10-25 20:52:14
2kb 用PrimeSTAR足够了，不行的话考虑下LAtaq，用PrimeSTAR  HS有点浪费

我再试一次二次PCR，不行的话，就换成LAtaq
赞一下 回复此楼
7楼2012-10-26 08:44:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hutingting

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhwenxing at 2012-10-25 21:24:35
1、我做的使用20ul体系，正常能够批出来2.8kb的片段，可以多做几管，合并使用即可，若要放大体系，请将酶的浓度降低，将dNTP的用量略减低。
2、如果模板没有比较特殊的序列或者结构，冷启动问题不大。
3、LAtaq也 ...

放大体系不是相应比例的放大吗？为什么是降低酶和dNTP的浓度
赞一下 回复此楼
8楼2012-10-26 08:45:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

植物园园长

金虫 (小有名气)
天根的Fast Hifi快速高保真酶很不错，4-5kb的片段 p的很容易，建议你试试。他们好像还有试用装，。
赞一下 回复此楼
在路上～～Marketing!
9楼2012-10-26 09:28:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

植物园园长

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hutingting: 金币+2, ★有帮助 2012-10-26 15:27:32
引用回帖:
7楼: Originally posted by hutingting at 2012-10-26 08:44:27
我再试一次二次PCR，不行的话，就换成LAtaq...

二次PCR多麻烦啊
赞一下 回复此楼
在路上～～Marketing!
10楼2012-10-26 09:29:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hutingting 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭