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jen1006

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】菌落PCR结果(望高手进来拆招……本人第一次做TA克隆,么经验) 已有9人参与


直接加单克隆菌液于普通PCR体系,M13载体通用引物,普通PCR程序,结果于照片,目的带690bp。不知道原因,是不是假阳性啊这个样子?

[ Last edited by jen1006 on 2011-1-10 at 10:37 ]
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amilie030312

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
提质粒做酶切,可能不是单克隆聚落。猜测可能是纯化的时候没弄好也没连好吧。
7楼2011-01-10 16:01:05
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

★ ★ ★
dhd997(金币+3):谢谢交流 2011-01-10 16:43:34
貌似这几个在倒数第三条带(marker)附近都有带,不知道在maker上是多少bp。

别重复了,直接挑两个白斑提质粒做下酶切(前提是多克隆位点上有合适的site)。

你的菌液是不是加多了?多大的PCR体系,加了多少ul菌液?
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-01-10 10:43:54
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

690bp,可以直接挑克隆送去测序了。一个反应23块钱,你在这儿做来做去时间也花了不少,酶用了不少,不划算。呵呵。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2011-01-10 10:56:12
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
非特异性产物不除,答案不解
4楼2011-01-10 11:50:39
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