应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】菌落PCR结果（望高手进来拆招……本人第一次做TA克隆，么经验）
121/2返回列表12下一页
查看: 2435  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jen1006

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】菌落PCR结果（望高手进来拆招……本人第一次做TA克隆，么经验） 已有9人参与


直接加单克隆菌液于普通PCR体系，M13载体通用引物，普通PCR程序，结果于照片，目的带690bp。不知道原因，是不是假阳性啊这个样子？

[ Last edited by jen1006 on 2011-1-10 at 10:37 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

科研

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-01-10 10:36:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

绿色荧光蛋白

木虫 (正式写手)

至尊木虫
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
哎，还是某来帮你解答下吧，看了这么多人回答都不靠谱啊，呵呵。

若用菌液做PCR快速筛选真转化子，方法是这样子的，记住了啊：取菌液50 uL-100 uL，盖紧盖子，用PARAFILM膜封好，这样做事防止加热过程中管口蹦开。然后，沸水浴5分钟后高速离心2-3分钟，取上清液为模板DNA，再行PCR即可。

你做的结果是非特异性扩增，是由于模板DNA纯度不够所致。也就是你做的PCR扩增是失败的。
赞一下(2人) 回复此楼
9楼2011-01-11 21:41:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★ ★
dhd997(金币+3):谢谢交流 2011-01-10 16:43:34
貌似这几个在倒数第三条带（marker）附近都有带，不知道在maker上是多少bp。

别重复了，直接挑两个白斑提质粒做下酶切（前提是多克隆位点上有合适的site）。

你的菌液是不是加多了？多大的PCR体系,加了多少ul菌液？
赞一下(1人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-01-10 10:43:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
690bp，可以直接挑克隆送去测序了。一个反应23块钱，你在这儿做来做去时间也花了不少，酶用了不少，不划算。呵呵。
赞一下 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2011-01-10 10:56:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
非特异性产物不除，答案不解
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-01-10 11:50:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

real339

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
只要条带中有你要的条带，就再进行个酶切检测就O了。PCR本来就不太准确的。
赞一下(1人) 回复此楼
天下没有免费的午餐
5楼2011-01-10 12:00:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

姜大磊

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
提质粒在PCR或者酶切一次吧，更能验证！
赞一下(1人) 回复此楼
Nevergiveup,neverslowdown;Nevergrowold,nevereverdieyoung......
6楼2011-01-10 14:23:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
提质粒做酶切，可能不是单克隆聚落。猜测可能是纯化的时候没弄好也没连好吧。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-01-10 16:01:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jen1006

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-01-10 10:43:54:
貌似这几个在倒数第三条带（marker）附近都有带，不知道在maker上是多少bp。

别重复了，直接挑两个白斑提质粒做下酶切（前提是多克隆位点上有合适的site）。

你的菌液是不是加多了？多大的PCR体系,加了多少 ...

谢谢诶，我重新再做次！
赞一下 回复此楼
8楼2011-01-11 15:03:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

CHONPaS

金虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
其实也不需要像楼上的那样麻烦
直接将菌落加入PCR体系即可，前面变性的时间长点，10分钟就可以了
P出来的主要的还是你的条带，或者楼主可以用质粒上的引物
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2011-01-11 23:41:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jen1006 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专硕306英一数二 +7 z1z2z3879 2026-03-16 9/450 2026-03-17 17:31 by ccjequ
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:27 by Little-xue
[基金申请] 被我言中：新模板不强调格式了，假专家开始管格式了 +3 beefly 2026-03-14 3/150 2026-03-17 16:45 by RRRKKK
[考研] 材料与化工求调剂 +5 为学666 2026-03-16 5/250 2026-03-17 16:40 by 无际的草原
[考研] 考研调剂 +3 淇ya_~ 2026-03-17 5/250 2026-03-17 09:25 by Winj1e
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨； 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[文学芳草园] 伙伴们，祝我生日快乐吧 +17 myrtle 2026-03-10 26/1300 2026-03-16 18:32 by 青橙Ln
[考研] 一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂 +5 Liwangman 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:10 by 我的船我的海
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家，不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 255求调剂 +3 李嘉慧， 2026-03-12 4/200 2026-03-14 16:58 by 有只狸奴
[考研] 复试调剂 +9 Copy267 2026-03-10 9/450 2026-03-13 23:45 by userper
[考研] 材料371求调剂 +9 鳄鱼? 2026-03-11 11/550 2026-03-13 22:53 by JourneyLucky
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂 +4 芬达46 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:04 by ruiyingmiao
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-12 5/250 2026-03-13 15:56 by 棒棒球手
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭