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jen1006

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】菌落PCR结果(望高手进来拆招……本人第一次做TA克隆,么经验)已有9人参与


直接加单克隆菌液于普通PCR体系,M13载体通用引物,普通PCR程序,结果于照片,目的带690bp。不知道原因,是不是假阳性啊这个样子?

[ Last edited by jen1006 on 2011-1-10 at 10:37 ]
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绿色荧光蛋白

木虫 (正式写手)

至尊木虫


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
哎,还是某来帮你解答下吧,看了这么多人回答都不靠谱啊,呵呵。

若用菌液做PCR快速筛选真转化子,方法是这样子的,记住了啊:取菌液50 uL-100 uL,盖紧盖子,用PARAFILM膜封好,这样做事防止加热过程中管口蹦开。然后,沸水浴5分钟后高速离心2-3分钟,取上清液为模板DNA,再行PCR即可。

你做的结果是非特异性扩增,是由于模板DNA纯度不够所致。也就是你做的PCR扩增是失败的。
9楼2011-01-11 21:41:34
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