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ap

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】求助测序结果分析 已有2人参与

从基因组中巢氏PCR得到一个基因,连接到载体上,在不同平板上挑了两个转化子测序。发现和我预期的序列只有85%左右的同源性,而两个转化子之间的同源性约是99%。
当时PCR基因的时候就很困难,杂带很多,主带不是目的带。
现在我自己分析,觉得可能因为我的菌种不对。因为如果是PCR或酶切连接中带进去的突变,不可能两个转化子同源性那么高。
还可能有其他原因吗?
谢谢!
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ap

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by scelab at 2010-12-15 11:59:23:
你扩的菌是基因组已测完的么?
如果是自己分的野生菌,扩出来70~100%同源都有可能,翻译成aa再比对试试。
或者再依据现在测的序列再设计引物扩一下原始菌株,再测序,基本上测出来是什么就是什么了。

谢谢指点!
我的菌是是测过序的菌,不过是老板要来的,不知道来源有没有问题。
3楼2010-12-15 12:06:34
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

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1949stone(金币+3):鼓励 2010-12-15 12:06:45
你扩的菌是基因组已测完的么?
如果是自己分的野生菌,扩出来70~100%同源都有可能,翻译成aa再比对试试。
或者再依据现在测的序列再设计引物扩一下原始菌株,再测序,基本上测出来是什么就是什么了。
小木虫之有关部门负责人
2楼2010-12-15 11:59:23
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ap

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by scelab at 2010-12-15 11:59:23:
你扩的菌是基因组已测完的么?
如果是自己分的野生菌,扩出来70~100%同源都有可能,翻译成aa再比对试试。
或者再依据现在测的序列再设计引物扩一下原始菌株,再测序,基本上测出来是什么就是什么了。

我测序的序列,翻译成aa有好多终止子。
这个基因的功能还不清楚,是假设蛋白,和另一个氧化还原酶的基因有一定相似度。
4楼2010-12-15 12:32:16
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

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dhd997(金币+1):good 2010-12-15 15:37:38
引用回帖:
Originally posted by ap at 2010-12-15 12:32:16:


我测序的序列,翻译成aa有好多终止子。
这个基因的功能还不清楚,是假设蛋白,和另一个氧化还原酶的基因有一定相似度。

既然测序过了,就直接分析那里面的可能的基因不就更直接?!
功能基因一般都在1k左右,有很多终止子的可能是片段太短,或者错配导致测序错误。

BTW,unknown function才好,你要是发现新的基因新的功能就发了
小木虫之有关部门负责人
5楼2010-12-15 12:37:07
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