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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】测序后发现pcr产物中碱基错配。原因？
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liaoyh

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】测序后发现pcr产物中碱基错配。原因？ 已有5人参与

将目的片段与载体相连转化大肠杆菌后，挑单克隆培养，pcr阳性鉴定有符合大小的目的片段，送菌液去南京金斯瑞测序（双向），结果发现有两个碱基错配，求指导。
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1楼 2010-12-12 21:00:32
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
首先看测序raw data如何，如果峰图很好的话，几乎肯定是你挑的克隆中的插入片段突变了。重新挑克隆吧，
BTW：如果突变不影响氨基酸序列的话，可以用
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3楼2010-12-13 09:38:08
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
rainwander(金币+2):呵呵，是这样子的。鼓励积极参与~~~ 2010-12-13 00:20:48
PCR本来就可能出错的，用高保真DNA聚合酶重新PCR，或者重新挑取其他克隆去测序。
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2楼2010-12-12 21:09:21
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xuqingchun33

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
与侧续峰比较错误的碱基，很大可能是公司读的错误
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在这个纷绕的世俗世界里，能够学会用一颗平常的心去对待周围的一切，也是一种境界。
4楼2010-12-13 09:39:39
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liaoyh

铁杆木虫 (正式写手)
谢谢，我的片段 不到一千，错配的地方峰图还是比较稳定，峰单一
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5楼2010-12-13 09:52:25
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