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liaoyh

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】测序后发现pcr产物中碱基错配。原因? 已有5人参与

将目的片段与载体相连转化大肠杆菌后,挑单克隆培养,pcr阳性鉴定有符合大小的目的片段,送菌液去南京金斯瑞测序(双向),结果发现有两个碱基错配,求指导。
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
rainwander(金币+2):呵呵,是这样子的。鼓励积极参与~~~ 2010-12-13 00:20:48
PCR本来就可能出错的,用高保真DNA聚合酶重新PCR,或者重新挑取其他克隆去测序。
2楼2010-12-12 21:09:21
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
首先看测序raw data如何,如果峰图很好的话,几乎肯定是你挑的克隆中的插入片段突变了。重新挑克隆吧,
BTW:如果突变不影响氨基酸序列的话,可以用
3楼2010-12-13 09:38:08
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xuqingchun33

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
与侧续峰比较错误的碱基,很大可能是公司读的错误
在这个纷绕的世俗世界里,能够学会用一颗平常的心去对待周围的一切,也是一种境界。
4楼2010-12-13 09:39:39
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liaoyh

铁杆木虫 (正式写手)

谢谢,我的片段 不到一千,错配的地方峰图还是比较稳定,峰单一
5楼2010-12-13 09:52:25
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12zhangwei

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
很正常,我现在也是挑了三个克隆只有一个克隆是正确,其它的都出现了错配
6楼2010-12-13 15:05:10
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