| 查看: 1293 | 回复: 4 | |||
[交流]
【求助】虚心向大家求教western blot
|
|||
|
各位大侠好！最近开始做western blot，我是新手，所以有些问题请教下大家： 1、从细胞中提蛋白时细胞数一般要达到多少啊？用6孔板长满细胞够吗？ 2、蛋白上样量一般多少合适呢？还有上样体积？ 3、检测的时候用DAB显色行吗？显色后是直接拍照还是用凝胶成像系统保存结果？ 用ECL怎样保存结果呢？ 新手，所以请各位大侠帮助下我！十分感谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急
已经有4人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有4人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有3人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有3人回复
-
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有4人回复
-
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助，Western-Blot转膜不成功
已经有22人回复
- 请教western blot 时蛋白稀释液情况
已经有4人回复
- western blot 请教
已经有10人回复
- western blot 求助，请高手指点一下
已经有8人回复
- western blot时marker问题求助
已经有18人回复
- Western blot中出现的问题-求高手指点
已经有17人回复
- Western Blot电泳蛋白质外漏问题求助
已经有22人回复
- 新手求助western blot
已经有22人回复
- 【求助】western blot 湿转 缓冲液 甲醇作用
已经有8人回复
- 【求助/交流】westernblot
已经有10人回复
- 【求助/交流】western blot 缺带 断带
已经有21人回复
- 【求助/交流】western blot
已经有35人回复
- 【求助/交流】western blot 显影后发现条带中空，求解答。
已经有8人回复
- western blot 半干转膜后，发现条带个别缺失，不知道什么原因，请教各位
已经有1人回复
- 【求助/交流】请教Western blot出现非特异性条带的怎么解决
已经有8人回复
- 【求助/交流】western blot中的怪现象，求解~~~
已经有19人回复
2楼2011-01-13 15:17:32
★ ★
xiajing_acm(金币+1):谢谢参与
novus(金币+1):谢谢交流！ 2011-01-14 15:38:50
xiajing_acm(金币+2): 2011-04-07 21:12:59
xiajing_acm(金币+2): 2011-04-12 08:25:32
xiajing_acm(金币+1):谢谢参与
novus(金币+1):谢谢交流！ 2011-01-14 15:38:50
xiajing_acm(金币+2): 2011-04-07 21:12:59
xiajing_acm(金币+2): 2011-04-12 08:25:32
|
1 我们当时一般用6cm平皿做，6孔板的细胞数长满应该在100万左右，也可以做。只不过提取出来的蛋白浓度不一样。 2 上样前需要测蛋白浓度，一般用BCA法。然后保证每个泳道的总蛋白量一致，在30~80μg之间。也就是说每个孔加的蛋白溶液体积不一样。但要用PBS补加至每孔上样体积一致。上样体积跟个人技术也有关，新手建议控制在20μl以内，这就要求你蛋白浓度要大一点，所以最初用6cm平皿比较好。 3 显色与你使用的抗体也有关，显色后用凝胶呈现系统拍照，有的还需要做灰度分析。 建议你去碧云天网站上查看WESTERN相关试剂的说明书。 |
3楼2011-01-14 11:39:20
简单回复
gwf24634楼
2011-02-24 09:17
回复
xiajing_acm(金币+1):谢谢参与
yk37825楼
2011-03-26 16:55
回复
xiajing_acm(金币+1):谢谢参与
