应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 【求助】虚心向大家求教western blot
51/1返回列表
查看: 1187  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xiajing_acm

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助】虚心向大家求教western blot

各位大侠好！最近开始做western blot，我是新手，所以有些问题请教下大家：
1、从细胞中提蛋白时细胞数一般要达到多少啊？用6孔板长满细胞够吗？
2、蛋白上样量一般多少合适呢？还有上样体积？
3、检测的时候用DAB显色行吗？显色后是直接拍照还是用凝胶成像系统保存结果？
   用ECL怎样保存结果呢？
   新手，所以请各位大侠帮助下我！十分感谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-11-30 18:08:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brilliantbug

木虫 (正式写手)
★ ★
xiajing_acm(金币+1):谢谢参与
novus(金币+1):谢谢交流！ 2011-01-14 15:38:50
xiajing_acm(金币+2): 2011-04-07 21:12:59
xiajing_acm(金币+2): 2011-04-12 08:25:32
1 我们当时一般用6cm平皿做，6孔板的细胞数长满应该在100万左右，也可以做。只不过提取出来的蛋白浓度不一样。
2 上样前需要测蛋白浓度，一般用BCA法。然后保证每个泳道的总蛋白量一致，在30~80μg之间。也就是说每个孔加的蛋白溶液体积不一样。但要用PBS补加至每孔上样体积一致。上样体积跟个人技术也有关，新手建议控制在20μl以内，这就要求你蛋白浓度要大一点，所以最初用6cm平皿比较好。
3 显色与你使用的抗体也有关，显色后用凝胶呈现系统拍照，有的还需要做灰度分析。
建议你去碧云天网站上查看WESTERN相关试剂的说明书。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-01-14 11:39:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

huangwensh

木虫 (著名写手)
★ ★
xiajing_acm(金币+1):谢谢参与
qinhy(金币+1):多谢回帖交流，欢迎常来药学版！ 2011-01-13 19:16:49
引用回帖:
Originally posted by xiajing_acm at 2010-11-30 18:08:58:
各位大侠好！最近开始做western blot，我是新手，所以有些问题请教下大家：
1、从细胞中提蛋白时细胞数一般要达到多少啊？用6孔板长满细胞够吗？
2、蛋白上样量一般多少合适呢？还有上样体积？
3、检测的时候用 ...

裂解液的说明书上都有此种裂解液合适的细胞浓度，可以参考，蛋白上样量一般的 蛋白用0.75mm的板20μl就够了，第三个问题，我不知道，
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-01-13 15:17:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭