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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR产物电泳检测 已有11人参与

提取的DNA琼脂糖凝胶电泳检测是有荧光亮带的,而PCR扩增800bp目的基因,扩增产物却没有出现亮带,Marker跑出来了,只是样品都没有亮带。扩增 程序都是参考文献上面的,扩增引物也是新合成的,怎么回事呢?我是前一天晚上扩增的,因太晚没有时间立即电泳检测,是放在-20度冰箱放置过夜,第二天电泳检测的,我想这样没有什么影响吧?为什么扩不出来呢?
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+3):谢谢交流!:tiger06: 2010-11-25 23:26:01
引用回帖:
Originally posted by piaoyuaaa at 2010-11-25 22:58:42:

哦,没有哦,不太懂这方面的,阳性对照是怎么设计的呢?用Marker做DNA模板?

阳性对照确保在你的反应体系和反应条件下能够扩增出目的条带,阴性对照可以排除污染。
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
4楼2010-11-25 23:05:15
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普通回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by piaoyuaaa at 2010-11-25 21:10:35:
提取的DNA琼脂糖凝胶电泳检测是有荧光亮带的,而PCR扩增800bp目的基因,扩增产物却没有出现亮带,Marker跑出来了,只是样品都没有亮带。扩增 程序都是参考文献上面的,扩增引物也是新合成的,怎么回事呢?我是前一 ...

有没有加阳性对照保证扩增体系和条件正确?
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
2楼2010-11-25 22:50:58
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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zhaohq1209 at 2010-11-25 22:50:58:

有没有加阳性对照保证扩增体系和条件正确?

哦,没有哦,不太懂这方面的,阳性对照是怎么设计的呢?用Marker做DNA模板?
3楼2010-11-25 22:58:42
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-11-25 23:26:08
一般的pcr产物可以放好几天呢,你这没有条带就奇怪了,可能本身就没有扩增出来!再试试!
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
5楼2010-11-25 23:10:58
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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2010-11-25 23:10:58:
一般的pcr产物可以放好几天呢,你这没有条带就奇怪了,可能本身就没有扩增出来!再试试!

恩,你知道阳性对照怎么设计的吗?谢谢!
6楼2010-11-25 23:14:20
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

★
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-26 08:26:41
引用回帖:
Originally posted by piaoyuaaa at 2010-11-25 23:14:20:

恩,你知道阳性对照怎么设计的吗?谢谢!

你pcr是做什么用?是单纯扩增基因还是做别的东西,如果只是扩增基因就不用对照,只需要看你扩增出来的条带大小是否符合当时引物设计时的大小,当时如果是做基因敲除的话,阳性对照肯定是必须滴!
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
7楼2010-11-25 23:27:22
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violet.zhou

木虫 (小有名气)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
PCR的条件有的时候不一定完全按照参考给出的标准,没有P出来的话,建议延长延伸时间。
8楼2010-11-26 10:51:38
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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2010-11-25 23:27:22:


你pcr是做什么用?是单纯扩增基因还是做别的东西,如果只是扩增基因就不用对照,只需要看你扩增出来的条带大小是否符合当时引物设计时的大小,当时如果是做基因敲除的话,阳性对照肯定是必须滴!

我提取的是基因组的DNA,然后想通过PCR,将目的基因扩出来,然后再进行变性梯度凝胶电泳,这需要阳性对照吗?怎么设计的呢?谢谢
9楼2010-11-26 11:23:50
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

引用回帖:
Originally posted by piaoyuaaa at 2010-11-26 11:23:50:

我提取的是基因组的DNA,然后想通过PCR,将目的基因扩出来,然后再进行变性梯度凝胶电泳,这需要阳性对照吗?怎么设计的呢?谢谢

你是用基因组的DNA作为模板进行扩增吗?如果是的话就不需要对照了,只需要看扩增出来的目的基因的大小正确就行了!
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
10楼2010-11-26 11:33:24
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