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wsc0451

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
十有八九就是根本没扩增出来了。。。当然最好还是做个阳性对照看下。。。
立意要高,做事要实
11楼2010-11-26 11:34:12
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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2010-11-26 11:33:24:


你是用基因组的DNA作为模板进行扩增吗?如果是的话就不需要对照了,只需要看扩增出来的目的基因的大小正确就行了!

恩,我是用基因组的DNA作为模板的,可是没有扩增出来,问题会出在哪里呢?
12楼2010-11-26 13:35:31
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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by wsc0451 at 2010-11-26 11:34:12:
十有八九就是根本没扩增出来了。。。当然最好还是做个阳性对照看下。。。

阳性对照怎么设计的呢?用什么做模板呢?
13楼2010-11-26 13:36:04
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aga0110125

银虫 (小有名气)


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PCR的阳性对照就是PCR一定能扩出目的条带的反应体系
在你这里,就是一定包含你目的片段的DNA,如确定含有你目的片段的基因组DNA
PS:不要太相信参考文献所给的数据,至少在合成引物前,先拿引物序列去和目的片段吻合一下,确定是特异引物;收到引物后,也要对比Tm值,确认扩增程序
14楼2010-11-26 15:26:50
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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by aga0110125 at 2010-11-26 15:26:50:
PCR的阳性对照就是PCR一定能扩出目的条带的反应体系
在你这里,就是一定包含你目的片段的DNA,如确定含有你目的片段的基因组DNA
PS:不要太相信参考文献所给的数据,至少在合成引物前,先拿引物序列去和目的片段 ...

包含目的片段的DNA ?我做的是巢式PCR,第一轮扩800bp,第二轮扩230bp.现在的问题是第一轮800bp都没有扩出来,要是阳性对照扩出来的话是我的模板的问题,要是没有扩出来的话是体系和程序的问题,对吗?那个包含目的片段的DNA用含800bp的Marker?是新手,不太懂这方面的,谢谢指导
15楼2010-11-26 16:29:02
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chunbaobei69

新虫 (初入文坛)


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可以试试增加循环次数,或者调整体系试试!
16楼2010-11-26 16:47:06
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xudan667

木虫 (正式写手)

有没有加阳性对照?
17楼2010-11-26 17:11:08
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yinsongna

金虫 (正式写手)


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你的模板是基因组,你同时扩一个内参基因做对照,如果内参基因也没有扩出来就是你的模板问题,如果内参基因扩出来了,你的目的条带没有的话,可能的问题就多了:1,PCR体系是否出错?2.退火温度是否合适?3.引物确定能用吗?你从什么文章上看来的?。。。。这年头学术造假太严重
18楼2010-11-26 19:55:35
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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by xudan667 at 2010-11-26 17:11:08:
有没有加阳性对照?

阳性对照怎么设计啊,怎么找到肯定包含目的片段的基因呢?我是新手,对这方面不懂哦。谢谢
19楼2010-11-28 17:24:15
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yuer9809

至尊木虫 (著名写手)


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楼主的理论知识太差了,连阳性对照和阴性对照都没搞明白是什么东西。PCR做不出来不是很正常吗?看楼主准备坐DGGE估计是环境样品的基因组了,不是土壤就是水体或粪便污泥什么的。我估计楼主连模板纯不纯都不知道。楼主能不能先好好补充下这方面的知识?
20楼2010-11-28 17:40:34
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