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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR产物电泳检测 已有11人参与

提取的DNA琼脂糖凝胶电泳检测是有荧光亮带的,而PCR扩增800bp目的基因,扩增产物却没有出现亮带,Marker跑出来了,只是样品都没有亮带。扩增 程序都是参考文献上面的,扩增引物也是新合成的,怎么回事呢?我是前一天晚上扩增的,因太晚没有时间立即电泳检测,是放在-20度冰箱放置过夜,第二天电泳检测的,我想这样没有什么影响吧?为什么扩不出来呢?
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aga0110125

银虫 (小有名气)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
PCR的阳性对照就是PCR一定能扩出目的条带的反应体系
在你这里,就是一定包含你目的片段的DNA,如确定含有你目的片段的基因组DNA
PS:不要太相信参考文献所给的数据,至少在合成引物前,先拿引物序列去和目的片段吻合一下,确定是特异引物;收到引物后,也要对比Tm值,确认扩增程序
14楼2010-11-26 15:26:50
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查看全部 21 个回答

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by piaoyuaaa at 2010-11-25 21:10:35:
提取的DNA琼脂糖凝胶电泳检测是有荧光亮带的,而PCR扩增800bp目的基因,扩增产物却没有出现亮带,Marker跑出来了,只是样品都没有亮带。扩增 程序都是参考文献上面的,扩增引物也是新合成的,怎么回事呢?我是前一 ...

有没有加阳性对照保证扩增体系和条件正确?
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
2楼2010-11-25 22:50:58
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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zhaohq1209 at 2010-11-25 22:50:58:

有没有加阳性对照保证扩增体系和条件正确?

哦,没有哦,不太懂这方面的,阳性对照是怎么设计的呢?用Marker做DNA模板?
3楼2010-11-25 22:58:42
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+3):谢谢交流!:tiger06: 2010-11-25 23:26:01
引用回帖:
Originally posted by piaoyuaaa at 2010-11-25 22:58:42:

哦,没有哦,不太懂这方面的,阳性对照是怎么设计的呢?用Marker做DNA模板?

阳性对照确保在你的反应体系和反应条件下能够扩增出目的条带,阴性对照可以排除污染。
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
4楼2010-11-25 23:05:15
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