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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR产物电泳检测
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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR产物电泳检测 已有11人参与

提取的DNA琼脂糖凝胶电泳检测是有荧光亮带的，而PCR扩增800bp目的基因，扩增产物却没有出现亮带，Marker跑出来了，只是样品都没有亮带。扩增 程序都是参考文献上面的，扩增引物也是新合成的，怎么回事呢？我是前一天晚上扩增的，因太晚没有时间立即电泳检测，是放在-20度冰箱放置过夜，第二天电泳检测的，我想这样没有什么影响吧？为什么扩不出来呢？
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1楼 2010-11-25 21:10:35
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+3):谢谢交流！:tiger06: 2010-11-25 23:26:01
引用回帖:
Originally posted by piaoyuaaa at 2010-11-25 22:58:42:

哦，没有哦，不太懂这方面的，阳性对照是怎么设计的呢？用Marker做DNA模板？

阳性对照确保在你的反应体系和反应条件下能够扩增出目的条带，阴性对照可以排除污染。
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
4楼2010-11-25 23:05:15
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普通回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by piaoyuaaa at 2010-11-25 21:10:35:
提取的DNA琼脂糖凝胶电泳检测是有荧光亮带的，而PCR扩增800bp目的基因，扩增产物却没有出现亮带，Marker跑出来了，只是样品都没有亮带。扩增 程序都是参考文献上面的，扩增引物也是新合成的，怎么回事呢？我是前一 ...

有没有加阳性对照保证扩增体系和条件正确？
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
2楼2010-11-25 22:50:58
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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zhaohq1209 at 2010-11-25 22:50:58:

有没有加阳性对照保证扩增体系和条件正确？

哦，没有哦，不太懂这方面的，阳性对照是怎么设计的呢？用Marker做DNA模板？
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3楼2010-11-25 22:58:42
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★
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scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-11-25 23:26:08
一般的pcr产物可以放好几天呢，你这没有条带就奇怪了，可能本身就没有扩增出来！再试试！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
5楼2010-11-25 23:10:58
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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2010-11-25 23:10:58:
一般的pcr产物可以放好几天呢，你这没有条带就奇怪了，可能本身就没有扩增出来！再试试！

恩，你知道阳性对照怎么设计的吗？谢谢!
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6楼2010-11-25 23:14:20
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-26 08:26:41
引用回帖:
Originally posted by piaoyuaaa at 2010-11-25 23:14:20:

恩，你知道阳性对照怎么设计的吗？谢谢!

你pcr是做什么用？是单纯扩增基因还是做别的东西，如果只是扩增基因就不用对照，只需要看你扩增出来的条带大小是否符合当时引物设计时的大小，当时如果是做基因敲除的话，阳性对照肯定是必须滴！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
7楼2010-11-25 23:27:22
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violet.zhou

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
PCR的条件有的时候不一定完全按照参考给出的标准，没有P出来的话，建议延长延伸时间。
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8楼2010-11-26 10:51:38
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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2010-11-25 23:27:22:


你pcr是做什么用？是单纯扩增基因还是做别的东西，如果只是扩增基因就不用对照，只需要看你扩增出来的条带大小是否符合当时引物设计时的大小，当时如果是做基因敲除的话，阳性对照肯定是必须滴！

我提取的是基因组的DNA,然后想通过PCR,将目的基因扩出来，然后再进行变性梯度凝胶电泳，这需要阳性对照吗？怎么设计的呢？谢谢
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9楼2010-11-26 11:23:50
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
引用回帖:
Originally posted by piaoyuaaa at 2010-11-26 11:23:50:

我提取的是基因组的DNA,然后想通过PCR,将目的基因扩出来，然后再进行变性梯度凝胶电泳，这需要阳性对照吗？怎么设计的呢？谢谢

你是用基因组的DNA作为模板进行扩增吗？如果是的话就不需要对照了，只需要看扩增出来的目的基因的大小正确就行了！
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10楼2010-11-26 11:33:24
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