应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】毕赤酵母表达无活性
91/1返回列表
查看: 1626  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

belinda227

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】毕赤酵母表达无活性 已有6人参与

我的蛋白是个同源四聚体，每个亚基的分子量为57KD，是胞内酶，AT含量很高，达到60%。选取亚基的片段与pPICZαA构建了重组表达载体，电转化SMD-1168宿主菌。前期经过抗生素梯度抗性筛选，并经PCR验证正确。根据操作手册，用甲醇诱导其表达，在上清液中一直无法测到酶活。请各位毕赤酵母表达高手指点迷津，谢谢了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-11-22 09:54:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-22 10:52:41
酵母是真核生物，分泌表达产物一般经过糖基化修饰的，有可能影响活性的。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-11-22 10:01:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流 2010-11-22 11:01:21
1 胞内多聚体酶能否分泌是个问题
2 AT含量过高也是个问题
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-11-22 10:55:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

belinda227

木虫 (小有名气)
请问还需要跑SDS-PAGE检测吗
赞一下 回复此楼
4楼2010-11-22 13:55:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2585165

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢回复 2010-11-22 16:55:18
你可以同时看看菌体是否有活性。不一定就会分泌出去。
赞一下(2人) 回复此楼
哎呀呀，别老说我丑，比起小时候，我这还真算是漂亮了！
5楼2010-11-22 15:45:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-22 16:55:02
请问你上清经过浓缩了吗？测蛋白含量了吗？会不会是因为蛋白含量太低了？
赞一下(2人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
6楼2010-11-22 15:46:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

belinda227

木虫 (小有名气)
了解了，谢谢各位了
赞一下 回复此楼
7楼2010-11-22 16:38:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

easthero

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-24 12:24:23
你的亚基是在四聚体的情况下才有活性，还是单个亚基就有活性。另外上清中表达的蛋白量一般都偏低，检测活性是否需要一定的反应条件，而上清中的培养基成分是否对它有影响，有否用培养基加入酶检测活性作为对照。
另外表达后的产物是否经纯化后做SDS-PAGE鉴定大小 ，有抗体的话还可做western-Blot进行确证。
赞一下(2人) 回复此楼
8楼2010-11-23 14:07:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

belinda227

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by easthero at 2010-11-23 14:07:54:
你的亚基是在四聚体的情况下才有活性，还是单个亚基就有活性。另外上清中表达的蛋白量一般都偏低，检测活性是否需要一定的反应条件，而上清中的培养基成分是否对它有影响，有否用培养基加入酶检测活性作为对照。
...

是在四聚体的状态才有活性，我直接去上清液跑SDS-PAGE， 结果用考马斯亮蓝染色物条带，应该是上清中的蛋白含量太低了，我用丙酮沉淀后准备再跑一次
赞一下 回复此楼
9楼2010-11-24 08:44:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 belinda227 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +11 基诺咪客 2026-08-17 15/750 2026-08-19 20:28 by super2002521
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +54 医学老男孩 2026-08-13 121/6050 2026-08-19 20:28 by 医学老男孩
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +9 kkkl_v 2026-08-19 9/450 2026-08-19 19:11 by 菜鸟遥感
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 cHIDTWCTtLlG 2026-08-19 6/300 2026-08-19 18:52 by oCMhZAsgNFoO
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 PnssoZglMj3v 2026-08-19 3/150 2026-08-19 18:04 by oCMhZAsgNFoO
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 PnssoZglMj3v 2026-08-19 4/200 2026-08-19 17:54 by oCMhZAsgNFoO
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +10 ziyangfang 2026-08-19 11/550 2026-08-19 17:19 by wdc28
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭