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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】目的基因为模板效果如何
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tian1203

银虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】目的基因为模板效果如何

一个1700的片段，以前扩的很好，一直转不进去。现在快用完了，郁闷的是现在扩不出来了。重提了基因组，换了酶还是不行。
没试过用目的片段当模板，不知效果如何。请教各位
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1楼 2010-11-21 11:41:00
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寂寞之巅

铁虫 (小有名气)
★
tian1203(金币+1):谢谢参与
tian1203(金币+1): 2010-11-21 12:38:13
可以的 只是不知道效率如何 我当时用目的基因为模板时可以扩出来，效率低一点而已
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2楼2010-11-21 11:49:52
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adslye

银虫 (正式写手)
★
tian1203(金币+1):谢谢参与
tian1203(金币+1): 2010-11-21 12:39:32
用目的片段当模板没问题，不过最好稀释下。
稀释倍数这个1-1000倍都行，具体根据你自己情况来。

另外，你从基因组里直接P可能有点难，可以试下用6碱基识别的内切酶切一下基因组，再来P，应该会容易点。

最后，怎么会一直连接转化有问题，TA克隆很成熟的，各公司的kit应该都没问题。

下次最好做个对照，阴性的，阳性的都做一个。一步步排除原因。
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3楼2010-11-21 11:52:37
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绝天

金虫 (正式写手)
★
tian1203(金币+1):谢谢参与
机哥太。。。
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4楼2010-11-21 11:54:50
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