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准博士

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】最近好郁闷 已有16人参与

最近真是好郁闷啊，每天晚上都是快十二点才回宿舍，做连接到T载体，连着做了两次，平板上都长不出东西来？大家帮我分析分析！
详细的是这样：我和两个师弟，一个师妹都同时要做转化测序，我们用的感受态是JM109，我师妹在周一做好的感受态，她也对照验证过，说：感受态没有问题。以下是我们的实验结果：
我：转四个不同的目的基因，第一次，四块平板，只有一块，长了六个菌。挑出来做菌体电泳，都有目的片段。现在正在准备提质粒。
第二次，重复，还是做了四个，有三个平板长，但每个平板只有一个菌。还是大概24小时才能清晰可见。
师弟1：转一个基因，平板长了很多，挑出做培养，准备做菌体电泳，但没有继续在氨苄液体培养基上生长，就此中断。
师弟2：转一个基因，24h平板没有长。
师妹：向别的实验室借的DH5α, 跟JM109同时做对照，发现两者长的菌数量差不多，都是个位数。另外，她还做了阳性对照，转了一个空载体，到JM109，带抗性的，对照也长了一两个。

[ Last edited by 准博士 on 2010-5-14 at 10:18 ]
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1楼 2010-05-13 23:17:22
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-14 12:32:59
感受态还是验证一下吧，你连control都有问题了，还敢确定感受态没有问题啊，如果抗性没问题，十有八九还是细胞不好
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2楼2010-05-13 23:20:58
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wwling

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢分享经验 2010-05-14 12:33:18
我前不久碰到一次这样的问题 结果是抗生素有问题
抗性也没加错 当时猜测抗生素药品污染了吧 或者浓度 太高了。。。
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3楼2010-05-13 23:31:02
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准博士

金虫 (正式写手)
感受态是我另一个师妹做的，我们的氨苄都是不同人配的，自己用自己配的，几个人同时做转化，都出现同样的问题。我师妹验证过感受态，她说感受态没问题。
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4楼2010-05-13 23:36:43
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泉微小新
1949stone:不要纯表情 2010-05-14 12:33:34
5楼2010-05-14 00:49:22
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wjklw88

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
谁让咱都是搞科研的呢?小事!
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我相信,努力了肯定会有收获的!
6楼2010-05-14 08:44:11
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pen_in

金虫 (正式写手)
把问题说的再详细点啊
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7楼2010-05-14 09:59:08
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xiaoru2010

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 准博士 at 2010-05-13 23:17:22:
最近真是好郁闷啊，每天晚上都是快十二点才回宿舍，做连接到T载体，连着做了两次，平板上都长不出东西来？大家帮我分析分析！
详细的是这样：我和两个师弟，一个师妹都同时要做转化测序，我们用的感受态是JM109， ...

我比你还郁闷，基本不长，会不会是培养基的问题呢？
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8楼2010-05-14 11:11:44
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-14 12:33:46
一定做对照，或者你哪个知道浓度的质粒，做倍数稀释，看长得克隆数，确定转化率，希望对你有帮助～
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9楼2010-05-14 11:38:02
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-14 16:21:28
你们咋确定感受态没问题的啊？感受态如果不好那就张斑长的不行呗，再有就是抗性可能太高了，抑制的基本不长了东西了，杂菌不长了，目的片段的菌也不长了。
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10楼2010-05-14 16:19:12
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