应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】2kb序列PCR一直P不出来
41/1返回列表
查看: 940  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

tll0922

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】2kb序列PCR一直P不出来 已有3人参与

本人最近一致在做一个2200bp左右的序列的PCR，此序列GC含量很高，有80%左右，而且内部有很多重复序列,,由于担心引物与序列内部的非特异性结合，所以引物设计时是从载体开始P的，但P出来的条带还不足1000bp，一直都是这个结果没让我很郁闷，我用的酶是Takara的TaqMIX和fermenta的Pfu，结果都一样。。。请问大家有遇到相似情况么？有什么好的解决办法么？谢谢~~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-12-07 16:32:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

waiwaidou_1983

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):鼓励 2010-12-07 17:34:32
rainwander(金币+5):灰常正确。奖励一下。 2010-12-07 17:52:51
GC含量高的话可以试试 在做PCR的时候 用GC buffer，TAKARA就有
赞一下(3人) 回复此楼
2楼2010-12-07 16:42:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):鼓励 2010-12-07 17:34:18
简易的办法就是PCR体系加5%的DMSO，有奇效
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-12-07 17:01:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

srlee

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by tll0922 at 2010-12-07 16:32:30:
本人最近一致在做一个2200bp左右的序列的PCR，此序列GC含量很高，有80%左右，而且内部有很多重复序列,,由于担心引物与序列内部的非特异性结合，所以引物设计时是从载体开始P的，但P出来的条带还不足1000bp，一直都 ...

同意2楼，我也对比过好几次pfu都没有条带。高GC序列PCR可以用TaKaRa的GC buffer和EX taq，效果非常好，可以试一下！
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-12-07 17:29:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tll0922 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭