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tll0922

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】2kb序列PCR一直P不出来 已有3人参与

本人最近一致在做一个2200bp左右的序列的PCR,此序列GC含量很高,有80%左右,而且内部有很多重复序列,,由于担心引物与序列内部的非特异性结合,所以引物设计时是从载体开始P的,但P出来的条带还不足1000bp,一直都是这个结果没让我很郁闷,我用的酶是Takara的TaqMIX和fermenta的Pfu,结果都一样。。。请问大家有遇到相似情况么?有什么好的解决办法么?谢谢~~~
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waiwaidou_1983

铜虫 (小有名气)

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1949stone(金币+1):鼓励 2010-12-07 17:34:32
rainwander(金币+5):灰常正确。奖励一下。 2010-12-07 17:52:51
GC含量高的话可以试试 在做PCR的时候 用GC buffer,TAKARA就有
2楼2010-12-07 16:42:03
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
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1949stone(金币+1):鼓励 2010-12-07 17:34:18
简易的办法就是PCR体系加5%的DMSO,有奇效
3楼2010-12-07 17:01:19
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srlee

铁杆木虫 (小有名气)


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引用回帖:
Originally posted by tll0922 at 2010-12-07 16:32:30:
本人最近一致在做一个2200bp左右的序列的PCR,此序列GC含量很高,有80%左右,而且内部有很多重复序列,,由于担心引物与序列内部的非特异性结合,所以引物设计时是从载体开始P的,但P出来的条带还不足1000bp,一直都 ...

同意2楼,我也对比过好几次pfu都没有条带。高GC序列PCR可以用TaKaRa的GC buffer和EX taq,效果非常好,可以试一下!
4楼2010-12-07 17:29:54
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