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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】2kb序列PCR一直P不出来
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tll0922

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】2kb序列PCR一直P不出来 已有3人参与

本人最近一致在做一个2200bp左右的序列的PCR，此序列GC含量很高，有80%左右，而且内部有很多重复序列,,由于担心引物与序列内部的非特异性结合，所以引物设计时是从载体开始P的，但P出来的条带还不足1000bp，一直都是这个结果没让我很郁闷，我用的酶是Takara的TaqMIX和fermenta的Pfu，结果都一样。。。请问大家有遇到相似情况么？有什么好的解决办法么？谢谢~~~
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1楼 2010-12-07 16:32:30
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srlee

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by tll0922 at 2010-12-07 16:32:30:
本人最近一致在做一个2200bp左右的序列的PCR，此序列GC含量很高，有80%左右，而且内部有很多重复序列,,由于担心引物与序列内部的非特异性结合，所以引物设计时是从载体开始P的，但P出来的条带还不足1000bp，一直都 ...

同意2楼，我也对比过好几次pfu都没有条带。高GC序列PCR可以用TaKaRa的GC buffer和EX taq，效果非常好，可以试一下！
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4楼2010-12-07 17:29:54
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waiwaidou_1983

铜虫 (小有名气)
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1949stone(金币+1):鼓励 2010-12-07 17:34:32
rainwander(金币+5):灰常正确。奖励一下。 2010-12-07 17:52:51
GC含量高的话可以试试 在做PCR的时候 用GC buffer，TAKARA就有
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2楼2010-12-07 16:42:03
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):鼓励 2010-12-07 17:34:18
简易的办法就是PCR体系加5%的DMSO，有奇效
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3楼2010-12-07 17:01:19
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