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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】最近好郁闷
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bettyshan

木虫 (正式写手)

梦幻biobrick
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
阳性对照都出现问题了，为什么能确定感受态没有问题呢?
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我们都是芸芸众生的小人物，相遇相知，都是幸福！
11楼2010-05-14 16:47:10
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bettyshan

木虫 (正式写手)

梦幻biobrick
引用回帖:
Originally posted by 准博士 at 2010-05-13 23:17:22:
最近真是好郁闷啊，每天晚上都是快十二点才回宿舍，做连接到T载体，连着做了两次，平板上都长不出东西来？大家帮我分析分析！
详细的是这样：我和两个师弟，一个师妹都同时要做转化测序，我们用的感受态是JM109， ...

请教一下楼主，什么是菌体电泳？如何进行该过程？谢谢
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我们都是芸芸众生的小人物，相遇相知，都是幸福！
12楼2010-05-14 16:47:45
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我考虑你们的抗性还是不能确定没有问题，虽然是自己配制自己的，但是怎么保证不是药品的问题呢，要排除一下。

再者，感受态有可能效率不一样，很有可能这次效率低了，差两个数量级，那就有可能出现长得太少。还有就是注意一下细胞密度

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-5-14 at 20:25 ]
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13楼2010-05-14 19:33:23
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准博士

金虫 (正式写手)
★
scelab:这个还是第一次听说~ 2010-05-15 22:32:18
scelab(金币+1):下次我也试试~~~ 2010-05-15 22:34:38
引用回帖:
Originally posted by bettyshan at 2010-05-14 16:47:45:

请教一下楼主，什么是菌体电泳？如何进行该过程？谢谢

菌体电泳就是提质粒的前两步，我们自己配的S1和S2。这样可以很快的鉴别
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14楼2010-05-14 20:04:28
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bettyshan

木虫 (正式写手)

梦幻biobrick
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-15 22:34:25
引用回帖:
Originally posted by 准博士 at 2010-05-14 20:04:28:


菌体电泳就是提质粒的前两步，我们自己配的S1和S2。这样可以很快的鉴别

S1和S2是常规的提质粒的配制方法吗？做完这两步后就直接跑电泳，那也就是相当于裂解了一下菌体，电泳时应该会有基因组，RNA和目的质粒吧，是这样的吗？
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我们都是芸芸众生的小人物，相遇相知，都是幸福！
15楼2010-05-15 10:59:06
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准博士

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by bettyshan at 2010-05-15 10:59:06:

S1和S2是常规的提质粒的配制方法吗？做完这两步后就直接跑电泳，那也就是相当于裂解了一下菌体，电泳时应该会有基因组，RNA和目的质粒吧，是这样的吗？

是的：
S1：50mM G，25 mM Tris-HCl，10 mM EDTA
S2：5M NaOH，10%SDS
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16楼2010-05-15 22:27:54
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 准博士 at 2010-05-15 22:27:54:


是的：
S1：50mM G，25 mM Tris-HCl，10 mM EDTA
S2：5M NaOH，10%SDS

加完s2，上样量多少呢？

这样跑出来的效果怎么样？

能达到区分的目的么？

有图么，给大家欣赏下撒
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小木虫之有关部门负责人
17楼2010-05-15 22:34:12
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准博士

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by scelab at 2010-05-15 22:34:12:

加完s2，上样量多少呢？

这样跑出来的效果怎么样？

能达到区分的目的么？

有图么，给大家欣赏下撒

加完S2，裂解5-10分钟，加入2-4 ul loading buffer，然后点样的话大概是6 ul。

能达到区分的目的，点样时再点一个你之前提取好的质粒，连接片段差不多的，（我通常选择比我的目的片段小的），这样可以排除空载体的情况。

图形的话  ，我不会上传呢！

[ Last edited by 准博士 on 2010-5-16 at 12:19 ]
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18楼2010-05-16 12:16:39
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yyb870809

铁杆木虫 (初入文坛)
★ ★ ★
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scelab(金币+2):鼓励新虫！欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-16 16:12:10
LZ可以试试复兴之后的菌液四度2500g离心两分钟，吸掉上面的培养基，用剩下的100ul培养基重悬菌液，再涂板
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19楼2010-05-16 12:36:56
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准博士

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yyb870809 at 2010-05-16 12:36:56:
LZ可以试试复兴之后的菌液四度2500g离心两分钟，吸掉上面的培养基，用剩下的100ul培养基重悬菌液，再涂板

不错，可以试试，呵呵
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20楼2010-05-16 22:47:30
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