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准博士

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】最近好郁闷 已有16人参与

最近真是好郁闷啊,每天晚上都是快十二点才回宿舍,做连接到T载体,连着做了两次,平板上都长不出东西来?大家帮我分析分析!
详细的是这样:我和两个师弟,一个师妹都同时要做转化测序,我们用的感受态是JM109,我师妹在周一做好的感受态,她也对照验证过,说:感受态没有问题。以下是我们的实验结果:
我:转四个不同的目的基因,第一次,四块平板,只有一块,长了六个菌。挑出来做菌体电泳,都有目的片段。现在正在准备提质粒。
第二次,重复,还是做了四个,有三个平板长,但每个平板只有一个菌。还是大概24小时才能清晰可见。
师弟1:转一个基因,平板长了很多,挑出做培养,准备做菌体电泳,但没有继续在氨苄液体培养基上生长,就此中断。
师弟2:转一个基因,24h平板没有长。
师妹:向别的实验室借的DH5α, 跟JM109同时做对照,发现两者长的菌数量差不多,都是个位数。另外,她还做了阳性对照,转了一个空载体,到JM109,带抗性的,对照也长了一两个。

[ Last edited by 准博士 on 2010-5-14 at 10:18 ]
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 准博士 at 2010-05-15 22:27:54:


是的:
S1:50mM G,25 mM Tris-HCl,10 mM EDTA
S2:5M NaOH,10%SDS

加完s2,上样量多少呢?

这样跑出来的效果怎么样?

能达到区分的目的么?

有图么,给大家欣赏下撒
小木虫之有关部门负责人
17楼2010-05-15 22:34:12
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-14 12:32:59
感受态还是验证一下吧,你连control都有问题了,还敢确定感受态没有问题啊,如果抗性没问题,十有八九还是细胞不好
2楼2010-05-13 23:20:58
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wwling

铜虫 (小有名气)


★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢分享经验 2010-05-14 12:33:18
我前不久碰到一次这样的问题 结果是抗生素有问题
抗性也没加错 当时猜测抗生素药品污染了吧 或者浓度 太高了。。。
3楼2010-05-13 23:31:02
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准博士

金虫 (正式写手)

感受态是我另一个师妹做的,我们的氨苄都是不同人配的,自己用自己配的,几个人同时做转化,都出现同样的问题。我师妹验证过感受态,她说感受态没问题。
4楼2010-05-13 23:36:43
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