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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助（SOS）分子标记
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yafang21

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求助（SOS）分子标记

最近在做一个分子标记，前面几个样PCR之后，PAGE的条带非常好，但是后面几个样不知道什么原因，根本就没有条带。甚是郁闷！刚开始怀疑是PCR仪的问题，但是在不同的PCR仪上的结果是一样的，都没有条带；用琼脂糖凝胶电泳判断是否是DNA的问题，但是发现DNA的条带非常清楚，并不是这个问题；PCR换了新的引物之后，还是没有条带；连之前做的有结果的样现在都没有条带了，能看到的就是marker一条带，说明染色也不是问题。现在真的很郁闷，哪位高手大侠能出面相救啊？不甚感激！

[ Last edited by 1949stone on 2010-3-21 at 08:48 ]
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1楼 2010-03-20 18:21:18
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
yafang21(金币+1):3q 2010-03-20 22:33
1949stone(金币+1): 2010-03-21 08:48
百分之八十以上的可能还是模板问题，应该不是质量问题，是模板浓度的问题，做个浓度梯度吧
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2楼2010-03-20 19:48:35
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uutree

铜虫 (小有名气)
yafang21(金币+1):换过酶和dNTP了，但是还是没有条带 2010-03-21 12:17
Taq酶或是dNTP出问题了
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3楼2010-03-21 10:39:43
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lansha8331

无虫 (小有名气)
yafang21(金币+1):重新把该灭菌的都灭了，还是没有条带，伤心死了，不知道原因在哪里，指能换其他引物了 2010-03-23 23:09
我以前也遇到过这种情况，很恼人的。尤其筛选分子标记这种重复性实验，做着做着就出不来带了。唯一的方法只能把实验停下来，一个成分一个成分的检查，Taq，dNTP，引物，模板，甚至ddH2O都有可能出问题，我有一次找了半天原因把水费完了，重新拿了一瓶水，问题就解决了————就这么简单。重要的是要有找问题的耐心，，，呵呵
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4楼2010-03-22 10:56:15
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薄荷女

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励交流经验 2011-04-19 00:05:50
我也出现过哦！筛选引物的时候还是可以的，引物筛选做完，开始进行全部DNA聚丙烯酰胺凝胶的时候，发现原来很好的引物，后来一条带都没有了。样品是一样加入的，就连模板还是一个管的，DD水也换了几次，可郁闷啦！还是没出来。后来不知道怎么了，又出来了，但是总觉得没有筛引物的时候条带多，清晰。
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用心成就事业，善行快乐人生... ...
5楼2011-04-18 09:25:21
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cxb-abc

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我认为你没有加进去样，体系没有摸索好。条件不稳定，建议好好摸索以下条件，再做不迟，慢慢来，一步一步分析。
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6楼2011-04-18 21:15:40
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