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yafang21

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求助(SOS)分子标记

最近在做一个分子标记,前面几个样PCR之后,PAGE的条带非常好,但是后面几个样不知道什么原因,根本就没有条带。甚是郁闷!刚开始怀疑是PCR仪的问题,但是在不同的PCR仪上的结果是一样的,都没有条带;用琼脂糖凝胶电泳判断是否是DNA的问题,但是发现DNA的条带非常清楚,并不是这个问题;PCR换了新的引物之后,还是没有条带;连之前做的有结果的样现在都没有条带了,能看到的就是marker一条带,说明染色也不是问题。现在真的很郁闷,哪位高手大侠能出面相救啊?不甚感激!

[ Last edited by 1949stone on 2010-3-21 at 08:48 ]
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uutree

铜虫 (小有名气)

yafang21(金币+1):换过酶和dNTP了,但是还是没有条带 2010-03-21 12:17
Taq酶或是dNTP出问题了
3楼2010-03-21 10:39:43
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yujiaping1

木虫 (著名写手)


yafang21(金币+1):3q 2010-03-20 22:33
1949stone(金币+1): 2010-03-21 08:48
百分之八十以上的可能还是模板问题,应该不是质量问题,是模板浓度的问题,做个浓度梯度吧
2楼2010-03-20 19:48:35
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lansha8331

无虫 (小有名气)

yafang21(金币+1):重新把该灭菌的都灭了,还是没有条带,伤心死了,不知道原因在哪里,指能换其他引物了 2010-03-23 23:09
我以前也遇到过这种情况,很恼人的。尤其筛选分子标记这种重复性实验,做着做着就出不来带了。唯一的方法只能把实验停下来,一个成分一个成分的检查,Taq,dNTP,引物,模板,甚至ddH2O都有可能出问题,我有一次找了半天原因把水费完了,重新拿了一瓶水,问题就解决了————就这么简单。重要的是要有找问题的耐心,,,呵呵
4楼2010-03-22 10:56:15
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薄荷女

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励交流经验 2011-04-19 00:05:50
我也出现过哦!筛选引物的时候还是可以的,引物筛选做完,开始进行全部DNA聚丙烯酰胺凝胶的时候,发现原来很好的引物,后来一条带都没有了。样品是一样加入的,就连模板还是一个管的,DD水也换了几次,可郁闷啦!还是没出来。后来不知道怎么了,又出来了,但是总觉得没有筛引物的时候条带多,清晰。
用心成就事业,善行快乐人生... ...
5楼2011-04-18 09:25:21
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