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[交流] 【求助/交流】原核表达急切求助!

各位虫友在做原核蛋白表达时,有没有这种情况:pet28a连入目的片段测序验证正确后后,转化BL21(DE3), 挑菌,37度过夜,取菌到新鲜培养基,接种量为1%,37度,在OD值达到0.6后,加入IPTG,终浓度为0.4mM,0.6mM,0.8mM, 30度诱导表达,近两个小时后,菌液变澄清,且有絮状白色沉淀,不知哪位虫友碰到过类似的情况?是不是有噬菌体的原因?还是。。。。。?正在表达的蛋白其中一个总是这样,换了许多宿主细胞都是这样,另外的一个蛋白虽然没有变澄清,但SDS-PAGE检测蛋白没有表达,不知虫友们有没有类似的经历?
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blackrose8089(金币+1): 2011-02-26 17:58:40
看起来像菌体自溶,是不是表达蛋白对宿主有毒性。
2楼2011-02-26 17:28:46
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blackrose8089(金币+1): 正在建立GST载体来用一下,看看能不能好些! 2011-02-26 17:59:27
这种情况下最好能换个载体试试
3楼2011-02-26 17:30:00
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