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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】原核表达急切求助！
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

[交流] 【求助/交流】原核表达急切求助！

各位虫友在做原核蛋白表达时，有没有这种情况：pet28a连入目的片段测序验证正确后后，转化BL21(DE3), 挑菌，37度过夜，取菌到新鲜培养基，接种量为1%，37度，在OD值达到0.6后，加入IPTG，终浓度为0.4mM，0.6mM，0.8mM， 30度诱导表达，近两个小时后，菌液变澄清，且有絮状白色沉淀，不知哪位虫友碰到过类似的情况？是不是有噬菌体的原因？还是。。。。。？正在表达的蛋白其中一个总是这样，换了许多宿主细胞都是这样，另外的一个蛋白虽然没有变澄清，但SDS-PAGE检测蛋白没有表达，不知虫友们有没有类似的经历？
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1楼 2011-02-26 16:27:17
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
blackrose8089(金币+1): 正在建立GST载体来用一下，看看能不能好些！ 2011-02-26 17:59:27
这种情况下最好能换个载体试试
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3楼2011-02-26 17:30:00
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
blackrose8089(金币+1): 2011-02-26 17:58:40
看起来像菌体自溶，是不是表达蛋白对宿主有毒性。
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2楼2011-02-26 17:28:46
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