应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PEGFP-N1与目的条带连不上
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
71/1返回列表
查看: 1452  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wjger

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】PEGFP-N1与目的条带连不上 已有5人参与

载体：PEGFP-N1

目的基因大小：1500bp左右

酶切位点：Hind3、BamH1

连接酶：TAKARA T4连接酶

实验过程：PCR产物与19T-simple载体连接，双酶切后，载体带与目的带很好，回收目的带与PEGFP双酶切回收结果连接，一直连不上。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-08-25 11:57:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snowice

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2):鼓励！ 2010-08-25 20:44:59
首先，大片断不太好连
再者，你是怎么判断是连接出了问题，感受态好不好用，做个载体自连实验吧，确定载体是切开的；注意一下连接体系载体和片段的比例，1:3~1:10吧，片段最好多点；16度连接过夜试试
赞一下(2人) 回复此楼
爱吃爱睡懒得要死的猪头
2楼2010-08-25 16:57:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjger

新虫 (初入文坛)
感受态是买的，别人也在用，T载体能切下来，但连不上目的载体，所以判断连接出的问题。比例1:3~1:7，4度过夜。
赞一下 回复此楼
3楼2010-08-27 11:00:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjger

新虫 (初入文坛)
连接酶借过别人正在用的试过，我们新买的也用过。
赞一下 回复此楼
4楼2010-08-27 11:02:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feiye2214

木虫 (正式写手)

我和你做的非常接近

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+2):谢谢交流 2010-08-27 14:50:12
我做的是pEGFP-1连接一个1.6kb的片段，双酶切EcoR I/BamH I，1.6kb的片段是PCR出来的，两端已经将酶切位点设计进引物序列了，我酶切后也跑过电泳再回收胶中DNA（具备粘性末端）的，但是效果也不好
后来，直接不跑胶回收了，用清洁试剂盒来清洁PCR产物的酶切溶液和质粒的酶切溶液后，然后直接连接，转化，一次成功
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2010-08-27 13:09:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sifantong

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
弱弱的问一句 什么是清洁试剂盒啊？
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-08-28 16:58:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

星之所在1991

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果在与pEGFP-N1的质粒载体中加入了终止子，就是基因在GFP之前但有终止子，常理来说应该不会表达GFP，可是问我的还是会表达，是终止子没有起作用吗？如果没有作用，那我这个质粒是不是可以用呢？
赞一下 回复此楼
7楼2015-03-23 21:51:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wjger 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +21 111623 2026-04-04 23/1150 2026-04-07 02:16 by BruceLiu320
[考研] 273求调剂 +20 麦小叮当 2026-04-06 23/1150 2026-04-06 22:22 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿郑州大学材料与化工085600，求调剂 +27 吃的不少 2026-04-02 27/1350 2026-04-06 15:19 by 495374996
[考研] 324求调剂 +3 k可乐 2026-04-05 4/200 2026-04-06 09:54 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学085600英一数二337分求调剂 +12 lyz0427 2026-04-03 12/600 2026-04-06 06:37 by houyaoxu
[考研] 求调剂 +11 熊二想上岸 2026-04-04 11/550 2026-04-05 22:21 by 醉翁wl
[考研] 一志愿北京交通大学材料工程总分358求调剂 +4 cs0106 2026-04-04 4/200 2026-04-05 18:46 by imissbao
[考研] 085500机械专硕初试288求调剂 +3 GZJguo666- 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:06 by jkddd
[考研] 328分调剂 +6 门men 2026-04-04 6/300 2026-04-05 13:40 by imissbao
[考研] 353求调剂 +10 MayUxw1 2026-04-03 10/500 2026-04-05 09:23 by 无际的草原
[考研] 277求调剂 +4 12A3 2026-04-02 5/250 2026-04-04 20:28 by 蓝云思雨
[考研] 309求调剂 +6 刘刘刘1231 2026-04-02 7/350 2026-04-04 13:41 by liucky
[考研] 本9一志愿2 0854低分专硕286求调剂 +9 芒种111 2026-04-04 9/450 2026-04-04 11:01 by tangruihua
[考研] 材料调剂 +11 吴棂颖！ 2026-04-03 11/550 2026-04-04 09:56 by 小小树2024
[考研] 297求调剂 +11 ljy20040718！ 2026-04-03 13/650 2026-04-04 09:23 by 来看流星雨10
[考研] 一志愿双非085502，267分，过四级求调剂 +3 再忙也要吃饭啊 2026-04-03 3/150 2026-04-04 05:03 by gswylq
[考研] 本科985，专业0812分336求调剂 +4 莫莫很行 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:31 by zhq0425
[考研] 338求调剂 +7 晟功? 2026-04-03 7/350 2026-04-03 16:46 by wxiongid
[考研] 071000生物学调剂 +8 知昭蔓 2026-04-02 8/400 2026-04-03 10:36 by macy2011
[考研] 生物学308分求调剂（一志愿华东师大） +6 相信必会光芒万� 2026-03-31 7/350 2026-04-02 23:16 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭