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wjger

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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在线: 3小时
虫号: 838963
注册: 2009-09-02
性别: MM
专业: 基础兽医学

[交流] 【求助/交流】PEGFP-N1与目的条带连不上已有5人参与

载体：PEGFP-N1

目的基因大小：1500bp左右

酶切位点：Hind3、BamH1

连接酶：TAKARA T4连接酶

实验过程：PCR产物与19T-simple载体连接，双酶切后，载体带与目的带很好，回收目的带与PEGFP双酶切回收结果连接，一直连不上。

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1楼2010-08-25 11:57:52

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snowice

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 996623
注册: 2010-04-14
性别: GG
专业: 医学分子遗传学

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2):鼓励！ 2010-08-25 20:44:59

首先，大片断不太好连
再者，你是怎么判断是连接出了问题，感受态好不好用，做个载体自连实验吧，确定载体是切开的；注意一下连接体系载体和片段的比例，1:3~1:10吧，片段最好多点；16度连接过夜试试

赞一下(2人)

爱吃爱睡懒得要死的猪头

2楼2010-08-25 16:57:43

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