应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PEGFP-N1与目的条带连不上
71/1返回列表
查看: 1407  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wjger

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】PEGFP-N1与目的条带连不上 已有5人参与

载体：PEGFP-N1

目的基因大小：1500bp左右

酶切位点：Hind3、BamH1

连接酶：TAKARA T4连接酶

实验过程：PCR产物与19T-simple载体连接，双酶切后，载体带与目的带很好，回收目的带与PEGFP双酶切回收结果连接，一直连不上。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-08-25 11:57:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snowice

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2):鼓励！ 2010-08-25 20:44:59
首先，大片断不太好连
再者，你是怎么判断是连接出了问题，感受态好不好用，做个载体自连实验吧，确定载体是切开的；注意一下连接体系载体和片段的比例，1:3~1:10吧，片段最好多点；16度连接过夜试试
赞一下(2人) 回复此楼
爱吃爱睡懒得要死的猪头
2楼2010-08-25 16:57:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjger

新虫 (初入文坛)
感受态是买的，别人也在用，T载体能切下来，但连不上目的载体，所以判断连接出的问题。比例1:3~1:7，4度过夜。
赞一下 回复此楼
3楼2010-08-27 11:00:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjger

新虫 (初入文坛)
连接酶借过别人正在用的试过，我们新买的也用过。
赞一下 回复此楼
4楼2010-08-27 11:02:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feiye2214

木虫 (正式写手)

我和你做的非常接近

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+2):谢谢交流 2010-08-27 14:50:12
我做的是pEGFP-1连接一个1.6kb的片段，双酶切EcoR I/BamH I，1.6kb的片段是PCR出来的，两端已经将酶切位点设计进引物序列了，我酶切后也跑过电泳再回收胶中DNA（具备粘性末端）的，但是效果也不好
后来，直接不跑胶回收了，用清洁试剂盒来清洁PCR产物的酶切溶液和质粒的酶切溶液后，然后直接连接，转化，一次成功
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2010-08-27 13:09:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sifantong

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
弱弱的问一句 什么是清洁试剂盒啊？
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-08-28 16:58:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

星之所在1991

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果在与pEGFP-N1的质粒载体中加入了终止子，就是基因在GFP之前但有终止子，常理来说应该不会表达GFP，可是问我的还是会表达，是终止子没有起作用吗？如果没有作用，那我这个质粒是不是可以用呢？
赞一下 回复此楼
7楼2015-03-23 21:51:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wjger 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿吉林大学材料学硕321求调剂 +3 Ymlll 2026-03-18 4/200 2026-03-18 18:57 by yeahyou
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +7 SUICHILD 2026-03-12 7/350 2026-03-18 18:31 by 30660438
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +7 llllkkkhh 2026-03-18 7/350 2026-03-18 17:18 by 216的故事
[考研] 311求调剂 +11 冬十三 2026-03-15 12/600 2026-03-18 14:36 by 星空星月
[考研] 0854可跨调剂，一作一项核心论文五项专利，省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考研] 281求调剂（0805） +5 烟汐忆海 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:30 by stone_128
[考研] 278求调剂 +5 烟火先于春 2026-03-17 5/250 2026-03-18 08:43 by 星空星月
[考研] 326求调剂 +5 上岸的小葡 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:26 by ruiyingmiao
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[考研] 【0856】化学工程（085602）313 分，本科学科评估A类院校化学工程与工艺，诚求调剂 +7 小刘快快上岸 2026-03-11 8/400 2026-03-17 16:57 by ruiyingmiao
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +6 薛云鹏 2026-03-15 6/300 2026-03-17 11:05 by 学员h26Tkc
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[考研] 302求调剂 +4 小贾同学123 2026-03-15 8/400 2026-03-17 10:33 by 小贾同学123
[考研] 278求调剂 +3 Yy7400 2026-03-13 3/150 2026-03-17 08:24 by laoshidan
[考研] 0703化学调剂 +6 妮妮ninicgb 2026-03-15 9/450 2026-03-16 16:40 by houyaoxu
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +5 d如愿上岸 2026-03-12 8/400 2026-03-16 15:19 by peike
[考研] 材料与化工求调剂一志愿 985 总分 295 +8 dream…… 2026-03-12 8/400 2026-03-13 22:17 by 星空星月
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生，2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭