24小时热门版块排行榜    

查看: 1397  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wjger

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】PEGFP-N1与目的条带连不上 已有5人参与

载体:PEGFP-N1

目的基因大小:1500bp左右

酶切位点:Hind3、BamH1

连接酶:TAKARA T4连接酶

实验过程:PCR产物与19T-simple载体连接,双酶切后,载体带与目的带很好,回收目的带与PEGFP双酶切回收结果连接,一直连不上。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjger

新虫 (初入文坛)

连接酶借过别人正在用的试过,我们新买的也用过。
4楼2010-08-27 11:02:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

snowice

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2):鼓励! 2010-08-25 20:44:59
首先,大片断不太好连
再者,你是怎么判断是连接出了问题,感受态好不好用,做个载体自连实验吧,确定载体是切开的;注意一下连接体系载体和片段的比例,1:3~1:10吧,片段最好多点;16度连接过夜试试
爱吃爱睡懒得要死的猪头
2楼2010-08-25 16:57:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjger

新虫 (初入文坛)

感受态是买的,别人也在用,T载体能切下来,但连不上目的载体,所以判断连接出的问题。比例1:3~1:7,4度过夜。
3楼2010-08-27 11:00:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feiye2214

木虫 (正式写手)

我和你做的非常接近

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看天(金币+2):谢谢交流 2010-08-27 14:50:12
我做的是pEGFP-1连接一个1.6kb的片段,双酶切EcoR I/BamH I,1.6kb的片段是PCR出来的,两端已经将酶切位点设计进引物序列了,我酶切后也跑过电泳再回收胶中DNA(具备粘性末端)的,但是效果也不好
后来,直接不跑胶回收了,用清洁试剂盒来清洁PCR产物的酶切溶液和质粒的酶切溶液后,然后直接连接,转化,一次成功
5楼2010-08-27 13:09:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专硕326求调剂 +5 墨煜姒莘 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:30 by 木瓜膏
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +8 一鸭鸭哟 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:35 by 沐霖12138
[考研] 化学调剂0703 +8 啊我我的 2026-03-11 8/400 2026-03-16 17:23 by 我的船我的海
[考研] 一志愿985,本科211,0817化学工程与技术319求调剂 +5 Liwangman 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:10 by 我的船我的海
[考研] 309求调剂 +5 花与叶@ 2026-03-10 5/250 2026-03-16 14:13 by 哦哦123
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历,论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[硕博家园] 深圳大学硕士招生(2026秋,传感器方向,仅录取第一志愿) +4 xujiaoszu 2026-03-11 8/400 2026-03-16 09:45 by xujiaoszu
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +5 薛云鹏 2026-03-15 5/250 2026-03-15 20:38 by Logic2024
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 268求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-14 6/300 2026-03-14 22:20 by 运气yunqi
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 一志愿华中农业大学071010,总分三百二,求调剂 +3 困困困困坤坤 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:35 by JourneyLucky
[考研] 327求调剂 +4 Ffff03 2026-03-10 4/200 2026-03-14 00:17 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +5 牛乳糖的卡卡 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:05 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +7 18880831720 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:10 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
[考博] 26申博求助 +3 跳跃饼干 2026-03-10 4/200 2026-03-10 21:15 by Tntcnn
信息提示
请填处理意见