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wjger

新虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】PEGFP-N1与目的条带连不上已有5人参与

载体：PEGFP-N1

目的基因大小：1500bp左右

酶切位点：Hind3、BamH1

连接酶：TAKARA T4连接酶

实验过程：PCR产物与19T-simple载体连接，双酶切后，载体带与目的带很好，回收目的带与PEGFP双酶切回收结果连接，一直连不上。

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1楼2010-08-25 11:57:52

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feiye2214

木虫 (正式写手)

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我和你做的非常接近

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+2):谢谢交流 2010-08-27 14:50:12

我做的是pEGFP-1连接一个1.6kb的片段，双酶切EcoR I/BamH I，1.6kb的片段是PCR出来的，两端已经将酶切位点设计进引物序列了，我酶切后也跑过电泳再回收胶中DNA（具备粘性末端）的，但是效果也不好
后来，直接不跑胶回收了，用清洁试剂盒来清洁PCR产物的酶切溶液和质粒的酶切溶液后，然后直接连接，转化，一次成功

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5楼2010-08-27 13:09:59

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