24小时热门版块排行榜    

查看: 1706  |  回复: 5

pamuk

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】克隆转化后菌液PCR无条带 已有5人参与

做TA克隆,转化后菌落长势良好,有做对照。
但是蓝白斑筛选时全部都是白斑(或者说没颜色,新手,未见过白斑是啥样),未见蓝斑,莫非X-gal或者IPTG失效?
后面挑选克隆子培养,均出现浑浊,但是以此为模板菌液PCR(使用引物与转化前PCR使用引物一样),未见条带。
各位大侠,原因会出现在那些地方呢?
新手盼解答----
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
全是白斑这种可能性太小了吧   估计是X-gal或者IPTG有失效的
一般连进去了  菌液pcr都能扩增出来
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
2楼2010-08-12 10:06:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sqhnsd

金虫 (正式写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可能蓝白斑筛选失效,一般不会都是白斑的
3楼2010-08-12 10:15:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pamuk

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by pamuk at 2010-08-12 02:00:33:
做TA克隆,转化后菌落长势良好,有做对照。
但是蓝白斑筛选时全部都是白斑(或者说没颜色,新手,未见过白斑是啥样),未见蓝斑,莫非X-gal或者IPTG失效?
后面挑选克隆子培养,均出现浑浊,但是以此为模板菌液 ...

准备X-gal和IPTG换新的看看

怎样判断连接有效?是不是这些克隆子都是假阳性的,怎么判断真连接进去了?
4楼2010-08-12 14:13:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wubingyue

铁虫 (初入文坛)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
有可能是PCR反应程序的问题,你试一下把预变性的时间调整为5分钟,我上次也和你是一样的情况,调整了反应程序后就扩出来了,加油
学习中
5楼2012-06-01 15:18:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
6楼2013-09-03 10:08:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 pamuk 的主题更新
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 1Nb0IVlmV6v0 2026-11-11 4/200 2026-11-13 11:18 by Equinoxhua
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 9/450 2026-11-13 11:02 by Equinoxhua
[考博] 27博士申请(市政/环境) +3 ladf 2026-11-12 3/150 2026-11-13 08:19 by Equinoxhua
[考博] 27博士申请 +5 白白白ly 2026-11-09 5/250 2026-11-13 05:01 by wlf1982
[教师之家] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 6/300 2026-11-13 04:21 by Equinoxhua
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 4/200 2026-11-12 12:28 by ECLTXnJnRSXf
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-11 5/250 2026-11-12 11:44 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 4/200 2026-11-12 11:22 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 czAiolzR0IJC 2026-11-10 8/400 2026-11-12 11:11 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 7/350 2026-11-12 10:16 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 FChKX8meu1ds 2026-11-09 8/400 2026-11-12 09:41 by HajghKOMynmz
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 3/150 2026-11-12 07:53 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 6/300 2026-11-12 06:03 by 9fOTqj074tIg
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 YHiw1gou1Eda 2026-11-10 6/300 2026-11-12 05:41 by 9fOTqj074tIg
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 8/400 2026-11-12 05:30 by 9fOTqj074tIg
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 10/500 2026-11-12 05:19 by 9fOTqj074tIg
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 8/400 2026-11-12 05:08 by 9fOTqj074tIg
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 4/200 2026-11-12 02:23 by 9fOTqj074tIg
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 7/350 2026-11-12 00:44 by 9fOTqj074tIg
[考博] 申请环境,微生物方向博士 +3 浅笑09 2026-11-08 3/150 2026-11-10 12:44 by 可淡不可忘
信息提示
请填处理意见