24小时热门版块排行榜    

查看: 1330  |  回复: 5

pamuk

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】克隆转化后菌液PCR无条带 已有5人参与

做TA克隆,转化后菌落长势良好,有做对照。
但是蓝白斑筛选时全部都是白斑(或者说没颜色,新手,未见过白斑是啥样),未见蓝斑,莫非X-gal或者IPTG失效?
后面挑选克隆子培养,均出现浑浊,但是以此为模板菌液PCR(使用引物与转化前PCR使用引物一样),未见条带。
各位大侠,原因会出现在那些地方呢?
新手盼解答----
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
全是白斑这种可能性太小了吧   估计是X-gal或者IPTG有失效的
一般连进去了  菌液pcr都能扩增出来
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
2楼2010-08-12 10:06:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sqhnsd

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可能蓝白斑筛选失效,一般不会都是白斑的
3楼2010-08-12 10:15:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pamuk

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by pamuk at 2010-08-12 02:00:33:
做TA克隆,转化后菌落长势良好,有做对照。
但是蓝白斑筛选时全部都是白斑(或者说没颜色,新手,未见过白斑是啥样),未见蓝斑,莫非X-gal或者IPTG失效?
后面挑选克隆子培养,均出现浑浊,但是以此为模板菌液 ...

准备X-gal和IPTG换新的看看

怎样判断连接有效?是不是这些克隆子都是假阳性的,怎么判断真连接进去了?
4楼2010-08-12 14:13:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wubingyue

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
有可能是PCR反应程序的问题,你试一下把预变性的时间调整为5分钟,我上次也和你是一样的情况,调整了反应程序后就扩出来了,加油
学习中
5楼2012-06-01 15:18:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
6楼2013-09-03 10:08:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 pamuk 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +5 holy J 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:42 by Catalysis25
[考研] 280求调剂 +11 咕噜晓晓 2026-03-18 12/600 2026-03-21 22:40 by ACS Nano——
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[基金申请] 学校已经提交到NSFC,还能修改吗? 40+4 babangida 2026-03-19 9/450 2026-03-21 16:12 by babangida
[考研] 279求调剂 +5 红衣隐官 2026-03-21 5/250 2026-03-21 14:59 by lature00
[考研] 307求调剂 +10 冷笙123 2026-03-17 10/500 2026-03-21 01:54 by JourneyLucky
[考研] 华东师范大学-071000生物学-293分-求调剂 +3 研究生何瑶明 2026-03-18 3/150 2026-03-21 01:30 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂 +10 S.H1 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:51 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 3/150 2026-03-20 23:24 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +8 小材化本科 2026-03-18 8/400 2026-03-20 23:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武理材料工程348求调剂 +3  ̄^ ̄゜汗 2026-03-19 4/200 2026-03-20 21:01 by zhukairuo
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
[考研] 生物学调剂招人!!! +3 山海天岚 2026-03-17 4/200 2026-03-19 21:34 by 怎么释怀
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[考研] 11408 一志愿西电,277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 一志愿211 0703方向310分求调剂 +3 努力奋斗112 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by houyaoxu
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
信息提示
请填处理意见