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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】克隆转化后菌液PCR无条带
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pamuk

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】克隆转化后菌液PCR无条带 已有5人参与

做TA克隆，转化后菌落长势良好，有做对照。
但是蓝白斑筛选时全部都是白斑（或者说没颜色，新手，未见过白斑是啥样），未见蓝斑，莫非X-gal或者IPTG失效？
后面挑选克隆子培养，均出现浑浊，但是以此为模板菌液PCR（使用引物与转化前PCR使用引物一样），未见条带。
各位大侠，原因会出现在那些地方呢？
新手盼解答----
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1楼 2010-08-12 02:00:33
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
全是白斑这种可能性太小了吧   估计是X-gal或者IPTG有失效的
一般连进去了  菌液pcr都能扩增出来
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
2楼2010-08-12 10:06:00
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sqhnsd

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可能蓝白斑筛选失效，一般不会都是白斑的
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-08-12 10:15:41
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pamuk

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by pamuk at 2010-08-12 02:00:33:
做TA克隆，转化后菌落长势良好，有做对照。
但是蓝白斑筛选时全部都是白斑（或者说没颜色，新手，未见过白斑是啥样），未见蓝斑，莫非X-gal或者IPTG失效？
后面挑选克隆子培养，均出现浑浊，但是以此为模板菌液 ...

准备X-gal和IPTG换新的看看

怎样判断连接有效？是不是这些克隆子都是假阳性的，怎么判断真连接进去了？
赞一下 回复此楼
4楼2010-08-12 14:13:22
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wubingyue

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有可能是PCR反应程序的问题，你试一下把预变性的时间调整为5分钟，我上次也和你是一样的情况，调整了反应程序后就扩出来了，加油
赞一下 回复此楼
学习中
5楼2012-06-01 15:18:08
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优扬与爱
6楼2013-09-03 10:08:14
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