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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】克隆转化后菌液PCR无条带
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pamuk

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】克隆转化后菌液PCR无条带 已有5人参与

做TA克隆，转化后菌落长势良好，有做对照。
但是蓝白斑筛选时全部都是白斑（或者说没颜色，新手，未见过白斑是啥样），未见蓝斑，莫非X-gal或者IPTG失效？
后面挑选克隆子培养，均出现浑浊，但是以此为模板菌液PCR（使用引物与转化前PCR使用引物一样），未见条带。
各位大侠，原因会出现在那些地方呢？
新手盼解答----
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1楼 2010-08-12 02:00:33
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pamuk

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by pamuk at 2010-08-12 02:00:33:
做TA克隆，转化后菌落长势良好，有做对照。
但是蓝白斑筛选时全部都是白斑（或者说没颜色，新手，未见过白斑是啥样），未见蓝斑，莫非X-gal或者IPTG失效？
后面挑选克隆子培养，均出现浑浊，但是以此为模板菌液 ...

准备X-gal和IPTG换新的看看

怎样判断连接有效？是不是这些克隆子都是假阳性的，怎么判断真连接进去了？
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4楼2010-08-12 14:13:22
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